实验9影响酶活的因素.ppt
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实验 9 影响酶促反应的因素 ——温度、pH、激活剂及抑制剂 实验目的 1.学习酶的催化作用特点及影响酶活力的主要因素 2.学习测定酶活力的实验方法 实验原理 生物机体广泛存在各种不同功能的酶,催化不同的生物化学反应: 过氧化氢酶能催化过氧化氢分解释放氧气和水;唾液淀粉酶可将淀粉逐步水解成各种糊精、麦芽糖,用碘显色或本尼迪试剂可以检验酶催化的水解反应产物,并比较反应速度,从而衡量酶的比活性。通过试管颜色反应,可以定性研究影响酶活性的因素。 酶催化反应的活力受到温度、酸碱度和离子强度等因素的影响。一般,温度每增高10℃,反应温度增加一倍,但同时,酶作为蛋白质,温度过高会发生变性逐渐失活,反应速度达到最大值时的温度称为某种酶的最适温度。 酶活力与环境酸碱度密切相关,某种酶只在一定pH范围才具有活力,酶活最高时的pH称为该酶的最适pH。 Cl-可以使淀粉酶的活力增加,是其激活剂;而Cu2+ 使淀粉酶的活力下降,是其抑制剂。 实验器材 材料:唾液 试剂:0.1% 蔗糖,0.1%淀粉, 1% 淀粉,0.2 mol/L Na2HPO4, 0.2 mol/L NaH2PO4, 1% NaCl, 1% CuSO4,1% Na2SO4,本尼迪试剂,碘水, 用具:50 mL 烧杯 2 ,试管,玻璃漏斗,刻度移液管(2mL,5 mL) ,1000 uL移液器,37℃恒温水浴,冰浴,电炉,沸水浴, 6孔白瓷板,一次性吸管 实验操作与现象 酶液的收集制备 漱口后,收集唾液 0.5mL,加入30倍去离子水稀释,混合。 配制酶促反应液时,其它组分均用刻度移液管进行;最后添加酶液时,可用移液器;显色反应,可用一次性吸管滴加试剂。 实验操作与现象 酶的专一性 结论:唾液淀粉酶专一性催化淀粉水解。 无酶对照 底物对照 试 管 1# 2# 3# 4# 备 注 0.1% 淀粉(mL) 2 - 2 - 0.1% 蔗糖(mL) - 2 - 2 唾液(mL) - - 0.5 0.5 水(mL) 0.5 0.5 - - 现 象 在白瓷盘中滴加2滴碘液,反应开始时和反应结束后分别取两滴反应液,观察显色反应(37 ℃反应10 分钟)。(此处可初步判断酶活力) 现 象 本尼迪试剂(mL) 0.1 0.1 0.1 0.1 沸水浴(min) 5 5 5 5 现 象 二 温度对酶活力的影响 试 管 1# 2# 3# 4# 5# 备 注 1% 淀粉(mL) 1.0 1.0 1.0 1.0 1.0 温度预处理 (2 min) 37 ℃ 0 ℃ 沸水浴 0 ℃ 沸水浴 唾液(mL) 0.5 0.5 0.5 0.5 0.5 反应 5 min 37 ℃ 0 ℃ 沸水浴 冷却 0 ℃ 37 ℃ 沸水浴 37 ℃ 碘液 (滴) 2 2 2 2 2 现 象 结论:本次实验条件下,唾液淀粉酶最适温度为? 0 ℃ 可逆性抑制酶活性;沸水浴则使酶变性失活。 操作注意:严格控制温度,碘显色反应均在控温处进行。酶活力较大、小的组,可以调节酶用量,或室温代替37 ℃进行。 三 pH对酶活力的影响 试 管 1# 2# 3# 4# 5# 备注 0.2 M Na2HPO4(mL) 0.16 0.56 1.47 2.43 2.84 0.2 M NaH2PO4(mL) 2.84 2.44 1.53 0.57 0.16 反应体系 pH 5.6 6.2 6.8 7.4 8.0 1% 淀粉(mL) 1 1 1 1 1 温度预处理 混匀,37 ℃孵育2 min 唾液(mL) 0.5 0.5 0.5 0.5 0.5 反应监控 每 1 min 取一滴,碘显色,至一管颜色变淡时 取出所有试管,各加入2-5 滴碘液。摇匀,观察 现 象 结论:实验测得唾液淀粉酶的最适pH为? 四 离子对酶活力的影响 试 管 1# 2# 3# 4# 备 注 1% 淀粉 (mL) 1.0 1.0 1.0 1.0 1% NaCl (mL) 1 - - - 1% CuSO4(mL) - 1 - - 1% Na2SO4(mL) - - 1 - 水(mL) - - - 1 摇匀,37 ℃反应2分钟。(据第一次显色情况,调节观测频度) 唾液(mL) 0.5 0.5 0.5 0.5 在白瓷盘中滴加2滴碘液,反应开始后每1-2min各管取
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