活细胞死细胞的染色方法.pdf

活细胞/死细胞染色试剂盒 产品组成： 产品编号 BB-4126-1 BB-4126-2 组份编号 规格 500T 1000T 试剂 A：染色液 Calcein AM 100ul 200ul 41260A 试剂 B：染色液 PI 100ul 200ul 41260B 试剂 C：10X 染色缓冲液 10ml 20ml 41260C 产品简介： BestBio 贝博活细胞/死细胞染色试剂盒是采用Calcein-AM/PI 双染细胞的方法染色活细 胞和死细胞。 Calcein-AM 是一种可对活细胞进行荧光标记的细胞染色试剂，Calcein-AM 由于在 Calcein 的基础上加强了疏水性，因此能够轻易穿透活细胞膜。当其进入到细胞质后，酯酶 会将其水解为 Calcein 留在细胞内，发出强绿色荧光。与其它同类试剂（如 BCECF-AM 和 Carboxy-fluorescein diacetate）相比，Calcein-AM 是最适合作为荧光探针去染活细胞的， 因为它的细胞毒性很低。Calcein 的激发和发射波长分别为 490 nm 和 515 nm。Calcein -AM 仅对活细胞染色。 作为核染色染料的 PI 不能穿过活细胞的细胞膜，它穿过死细胞膜的无序区域而到达细 胞核，并嵌入细胞的 DNA 双螺旋从而产生红色荧光(激发：488 ，545nm，发射：617 nm)， 因此PI 仅对死细胞染色。 由于Calcein-DNA 和 PI-DNA 都可被 490 nm 激发，因此可用荧光显微镜同时观察活细 胞和死细胞。用 545 nm 激发，仅可观察到死细胞。根据以上特点，Calcein, AM 和 PI 经常 被结合用来作为活细胞和死细胞的双重染色。 使用方法： 使用方法： 1、 染色工作液的配制： 根据样品数按下列比例配制染色工作液。 取 1ml 试剂 C 加 9ml 无菌去离子水稀释，混匀即成 1X 染色缓冲液。每 10ml 1X 染色缓 冲液中加入 10ul 染色液 A 和 3-10ul 染色液 B ，充分混匀，即成染色工作液。 6 2 、 收集样本细胞，细胞数量在 1X10 个以内。 3、 用 PBS 洗涤细胞两次。 4、 用 200ul 染色工作液将细胞重悬。 5、 4℃避光孵育 15-30 分钟。 6、 用 PBS 洗涤细胞。 7、 用适量 PBS 重悬细胞。 8、 用荧光显微镜或流式细胞仪检测结果。染料-DNA 复合物的最大激发 490±10nm，最大发 射波长分别为 515nm 和617nm。 - 1 - 结果分析 ： 荧光显微镜下，使用 490 ±10nm 波长激发，活细胞为黄绿色，死细胞为红色。 用 545 nm 波长激发，能够看到红色的死细胞。 相关产品： 产品 产品号 产品 产品号 Annexin V-FITC/PI凋亡试剂盒 BB-4101 细胞周期检测试剂盒 BB-4104 Annexin V-EGFP/PI凋亡试剂盒 BB-4102 JC-1线粒体膜电位试剂盒 BB-4105 MTT细胞增殖及毒性检测试剂盒 BB-4201 Caspase 3 活性