几种家畜淋巴细胞培养方法和染色体组型.pdf

几种家畜淋巴细胞培养 方法和染色体组型 吕 群 江绍慧 何银瑛 吴观仁 （复旦大学遗传研究所） 上（海食品公司中心实验室） 随着工农业生产的飞跃发展，我国对家畜 培养液的配制和分装均需在无菌条件下进 遗传育种、家畜疾病防治、家畜饲养管理等方面 行。 都已开展了很多有意义的研究。在这些研究 三（）血液样品的采取及培养 中，有时为了确定家畜品种在遗传结构上的变 剪去动物颈部局部区域的鬃毛，用碘酒、酒 异情况，常常需要对作为遗传物质基础的染色 精先后消毒。把预先消毒过的针筒 针（头要长 体进行观察和分析。 为此，我们以正常猪 而粗，一般用10号）用肝素湿润，每头动物抽取 (Susscrofadomesticus)、牛 归ostaurusLinn), 颈静脉血 ，毫升，换上7号针头，在酒精灯火焰 羊 O（viscries）的外周血淋巴细胞为材料，应用 旁小心穿人培养瓶的橡皮塞，每瓶培养液中滴 简便的半微量外周血培养方法，分析了正常猪、 人血样0.5毫升，将瓶子略加摇动，使滴入的血 牛、羊的染色体组型。现将有关方法和结果报 液与培养液均匀混合，在38.5-39.5℃恒温箱 告如下。 中培养 “-72小时。 （四） 细胞学技术 培 养 方 法 培养终止前4-6小时加秋水仙素，使每瓶 依据Tip，等[21［和项维等[1]［简便的半微量外 培养物的最终浓度为0.4-0.8微克／毫升。放回 周血培养方法，采用 RPMI1640培养液进行培 温箱继续培养72小时。取出培养瓶，用吸管吸 养。 去上层培养液，余留培养液和培养物1毫升左 （一） 培养液的配制 右，加入预温过的蒸馏水8毫升，用吸管轻轻冲 称10.5gRPMI164。粉末，溶解在1,000毫 打均匀，放人温箱中处理25分钟。移人离心 升双重蒸馏水中，用赛氏细菌滤器过滤除菌 滤（ 管，1000转／分离心7分钟。吸尽上清液，留在 板用醋酸纤维素醋，孔径为0.3微米）。使用时， 管底的细胞团用三份甲醇对一份冰酷酸的固定 80毫升 1640培养液，加人20毫升小牛血清， 液固定 1弓分钟，再用比例倒置的固定液，即一 、毫升植物凝血素’PHA 用（简便的盐水方法 份甲醇对三份冰醋酸固定15分钟。然后离心， 提取的），2毫升肝素 (500单位／毫升），再加青 转速同上。吸去固定液，另加3-4滴新鲜固定 霉素、链霉素各10,000单位。最后用 3.50o 液，用吸管将细胞团冲散均匀，做成细胞悬浮 NaHC03调节培养液 pH至 7.2-7.5。 液。事先将玻片放在冰箱的冰格中，将一滴细 二（） 培养液的分装 胞悬浮液滴在有一层薄冰霜的载玻片上。细胞 配好的培养液分装在20毫升容积的小口玻 在载玻片上很快分散铺开，吹干。用pH7.4的 璃瓶中。每瓶装5毫升，用反口橡皮塞塞紧，保 磷酸缓冲液稀释的 Giemsa染色1小时，用自 存在。℃条件下备用。 使用前需放在370C温 来水轻轻冲洗，吹干，便可进行显微镜观察。 箱中温育20分钟。 用上述方法培养的猪、牛、羊外周血淋巴细 2 〕‘ 胞，染色体中期分裂相较多。我们随机作了统 一（） 猪染色体组型 计，在猪的外周血培养物中，50个视野 (80倍） 家猪外周血淋巴细胞染色体的数目2，二 平均每一视野