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RNA干扰CD133基因对人结肠癌干细胞生物学特性的影响的开题报告

一、研究背景

结肠癌是常见的恶性肿瘤，治疗难度较大，易复发和转移。干细胞（cancerstemcells，CSCs）在结肠癌的发生和发展中起重要作用，具有自我更新、增殖能力强的特点，是结肠癌治疗中的重点。CD133作为结肠癌干细胞标志物之一，参与了结肠癌干细胞的自我更新、增殖和肿瘤形成过程，因此成为治疗结肠癌干细胞的新的靶标。

RNA干扰技术是一种有效的基因沉默技术，可以在细胞内选择性地降低特定基因的表达。已有研究显示，RNA干扰CD133基因可以有效地抑制结肠癌干细胞的增殖和侵袭能力，但对干细胞生物学特性的影响尚未完全阐明。

二、研究目的

本研究旨在探讨RNA干扰CD133基因对人结肠癌干细胞生物学特性的影响，以期为其治疗提供新的思路和方法。

三、研究内容和方法

1.研究内容：

（1）建立结肠癌干细胞模型；

（2）构建RNA干扰CD133基因的质粒；

（3）转染RNA干扰CD133基因质粒并筛选稳定转染细胞株；

（4）比较RNA干扰CD133基因和空质粒对结肠癌干细胞的增殖、侵袭、自我更新和耐药能力的影响；

（5）检测RNA干扰CD133基因的效果和干扰后结肠癌干细胞的细胞信号通路变化。

2.研究方法：

（1）分离人结肠癌组织细胞并诱导其成为干细胞；

（2）利用PCR技术构建RNA干扰CD133基因的质粒，并经过验证确定筛选浓度和时间；

（3）利用脂质体方法将RNA干扰CD133基因质粒或空质粒转染入细胞，经筛选获得稳定转染细胞株；

（4）利用MTT检测RNA干扰CD133基因对细胞增殖的影响，Transwell实验检测其对细胞侵袭的影响，肿瘤球形培养法检测对干细胞的自我更新能力的影响，流式细胞术检测其对抗化疗药物的耐药性的影响；

（5）Westernblot检测RNA干扰CD133基因后相关信号通路的变化。

四、研究意义

本研究将深入探讨RNA干扰CD133基因对人结肠癌干细胞生物学特性的影响，为结肠癌的治疗提供新的思路和基础数据，有望为临床提供治疗结肠癌干细胞的新方法和方向。