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RNA干扰技术阻断PTEN基因表达对SACC-83细胞系的影响的开题报告

【摘要】

RNA干扰技术是一种基因靶向的干扰技术，可靶向特定的mRNA序列并导致其降解或抑制翻译过程，从而实现对基因表达的调节。PTEN基因作为肿瘤抑制基因，在多种肿瘤中发挥重要作用，然而其在唾液腺癌中的表达情况及其作用机制尚不明确。本研究将运用RNA干扰技术靶向PTEN基因，并对其对SACC-83细胞系的影响进行分析，以期深入探究PTEN基因在唾液腺癌中的作用机制，为寻找新的治疗目标提供理论依据。

【关键词】RNA干扰技术；PTEN基因；SACC-83细胞；唾液腺癌

【正文】

一、研究背景

RNA干扰技术是一种基因靶向的干扰技术，可通过特定的siRNA或shRNA靶向特定的mRNA序列，从而导致其降解或抑制翻译过程，从而实现对基因表达的调节。RNA干扰技术在基因功能研究、基因治疗等领域具有广泛应用。

PTEN（PhosphataseandTensinhomolog）基因是一种重要的肿瘤抑制基因，其编码的蛋白质能够通过脱去PIP3磷酸基团来抑制PI3K信号通路的活化，从而对细胞增殖、凋亡、迁移等过程产生调节作用。PTEN基因的突变、丢失或表达降低与多种肿瘤的发生、发展密切相关。然而，PTEN基因在唾液腺癌中的表达情况及其作用机制尚不明确。

SACC-83细胞系是一种常见的唾液腺癌细胞系，广泛应用于唾液腺癌的研究中。本研究将运用RNA干扰技术靶向PTEN基因并对其在SACC-83细胞系中的表达进行干扰，从而探究PTEN基因在唾液腺癌中的作用机制。

二、研究目的

1.检测SACC-83细胞系中PTEN基因的表达情况；

2.应用RNA干扰技术靶向PTEN基因并检测其在SACC-83细胞系中的表达情况；

3.分析PTEN基因的干扰对SACC-83细胞系增殖、凋亡和迁移能力的影响，探究其在唾液腺癌中的作用机制。

三、研究方法

1.细胞培养及siRNA转染：选择SACC-83细胞系并进行细胞培养。利用lipofectamine?2000转染siRNA，包括特异性靶向PTEN基因的siRNA和负对照siRNA。

2.实时荧光定量PCR：提取细胞总RNA并进行反转录，最终通过实时荧光定量PCR检测PTENmRNA表达水平。

3.Westernblot：将细胞裂解并获取蛋白质，然后进行SDS电泳和transfer压膜，最终利用Westernblot技术检测PTEN蛋白表达水平。

4.CCK-8实验：分别检测每组细胞在不同时间点的增殖情况。

5.Transwell实验：分别检测每组细胞在Transwell板上的穿膜能力。

6.细胞凋亡检测：利用AnnexinV-FITC/PI染色法检测细胞凋亡情况。

四、研究意义

本研究将利用RNA干扰技术靶向PTEN基因并对其在SACC-83细胞系中的表达进行干扰，从而探究PTEN基因在唾液腺癌中的作用机制。结果有望为唾液腺癌的防治提供理论依据和新的治疗靶点。