血红蛋白的提取和分离教学PPT课件.pptx

专题5 DNA和蛋白质技术课题 血红蛋白的提取和分离基础知识课本67页四由___条肽链组成，包括两条________和两条________。其中每条肽链环绕____________基团，此基团可携带一分子___或一分子__________。血红蛋白因含有_______而呈现红色。α-肽链β-肽链最多约90%是血红蛋白亚铁血红素氧二氧化碳血红素基础知识课本64页提取分离蛋白质的基本思路： 根据蛋白质各种特性差异，如分子的形状和大小、所带电荷的性质和多少、溶解度、吸附性质和对其他分子的亲和力，等等，可以用来分离不同种类的蛋白质。凝胶色谱法概念：也称分配色谱法，是根据______________的大小分离蛋白质的有效方法。凝胶：是一些_______化合物构成的内含 许多贯穿的通道的微小的_______球体。 如葡聚糖或琼脂糖。相对分子质量多糖类多孔凝胶色谱法原理：相对分子量_____的蛋白质容易进入凝胶_____的通道，路程_______，移动速度______。相对分子量_____的蛋白质无法进入凝胶内部的通道，只能在凝胶______移动，路程_____，移动速度______。内部较小较长较慢较大外部较短较快凝胶色谱法从色谱柱上端不断注入缓冲液，使蛋白质分子差速运动洗脱开始蛋白质混合物上柱小分子流动慢大分子流动快后收集大分子先收集大分子1.使用凝胶色谱法分离蛋白质实验中,相对分子质量不同的蛋白质在凝胶中的行进过程,可表示为图中 （ ）BA基础知识课本65页缓冲溶液酸和碱pH作用：在一定范围内，能够抵制外界________对溶液____的影响，维持____基本不变。配制：缓冲溶液通常由1~2种_______溶解于水中配制而成。 调节缓冲剂的_________就可以制得在不同PH范围内使用的缓冲液。常见缓冲剂：H2CO3/NaHCO3 NaH2PO4/Na2HPO4pH缓冲剂使用比例 利用缓冲液模拟细胞内的PH环境，保证血红蛋白的正常结构和功能，便于观察和科学研究。基础知识课本65页电泳迁移电场概念：带电粒子在______的作用下发生______的过程。原理：许多生物大分子都具有可解离的基团，在一定pH下，这些基团会带上______或______。在电场的作用下，这些带电分子会向着与所带电荷_____________移动。电泳利用了待分离样品中各种分子_______________以及分子本身的______、______的不同，使带电分子产生______________，从而实现样品分离。分类：（常见）琼脂糖凝胶电泳和___________________。正电负电相反的电极大小 形状带电性质的差异不同的迁移速度聚丙烯酰胺凝胶电泳在测定蛋白质分子量时通常使用SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳。SDS作用：①SDS能使蛋白质发生完全变性，由几条肽链组成的蛋白质复合体在SDS的作用下会解聚成单条肽链。因此测定的结果只是单条肽链的分子量。消除了不同蛋白质的构象差异。②SDS能够与各种蛋白质形成SDS-蛋白质复合物，SDS所带负电荷的量大大超过了原蛋白质所带电荷，各种是SDS-蛋白质复合物均带相同密度的负电荷。因此消除了不同种蛋白质间的电荷差异。电泳迁移率完全取决于分子的大小测定分子量时，可选用一组已知分子量的标准蛋白（Marker）同时进行电泳。分子量大→阻力大→迁移速率慢C1.下列生物大分子的分离方法所对应的原理，错误的是（ ）A.DNA的粗提取——DNA与杂质的溶解性不同B.凝胶色谱法分离蛋白质——蛋白质分子大小的差异C.SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳法分离蛋白质——蛋白质所带电荷的差异D.用丙酮提取叶绿体中的叶绿素——色素与其他成分的溶解性不同实验操作课本66页样品处理及粗分离实验操作①红细胞的洗涤目的：去除杂蛋白，以便后续步骤的分离纯化洗涤过程：吸出血浆5倍体积生理盐水短时间低速离心500r/min2min100ml血液缓慢搅拌10min血浆红细胞红细胞重复洗涤三次，直至上清液没有黄色3g柠檬酸钠离心速度过高和时间过长会使白细胞等一同沉淀，达不到分离效果样品处理及粗分离实验操作②血红蛋白的释放 加蒸馏水到原血液体积，再加40%体积的甲苯，至于磁力搅拌器上充分搅拌10min，细胞破裂释放出血红蛋白。目的：红细胞破裂，血红蛋白释放出来目的分析：a.蒸馏水的作用是_________________________。b.加入甲苯的作用是_______________________。c.充分搅拌的目的是_______________________。使红细胞大量吸水胀破溶解红细胞的细胞膜加速红细胞的破裂样品处理及粗分离实验操作③分离血红蛋白溶液去除脂溶性物质沉淀层2000r/min高速离心10min红细胞破碎混合