流式细胞仪的临床应用.pdf

. 流式细胞仪的原理及其临床应用 作者 : zfy5956 ( 站内联系 TA) 发布 : 2006-05-11 流式细胞技术 (FCM)是 70 年代发展起来得一种快速对单细胞定量分析的新技术 , 它借簦了荧光显微镜技术 , 同时利用与荧光染料 , 激光技术 , 单抗技术以及计算机 技术的发展 , 将荧光显微镜的激发光源改为激光 , 使之具有更好的单色性与激发 效率 , 因而大大提高了检测灵敏度 , 同时将固定的标本台改为流动的单细胞悬液 , 用计算机进行数据处理 , 因而大大提高了检测速度与统计精确性 , 而且从同一个 细胞中可以同时测得多种参数 , 为生物医学与临床检验学发展提供了一个全新的 视角和强有力的手段 . 目前, 该技术已经广泛用于基础研究与临床应用 , 在免疫学 , 遗传学 , 血液学 , 肿瘤学等领域内发挥前重要的作用 . 本文着重介绍流式细胞仪基 本原理及其在临床上的应用 . 一 . 基本原理 流式细胞仪的主要结构可以大致分为这样几个组成部分 : 激光系统 , 流式系 统 , 信号处理及放大 , 计算机系统 . 图一, 图二概括了流式细胞仪的基本原理 , 当待 测标本被制务成单细胞悬液 , 经染色后进入流动室 , 流动室内充满流动的鞘液 , 鞘 液压力与样品流压力是不同的 , 当二者的压力差异达到一定程度时 , 鞘液裹挟着 的样品流中细胞排成单列逐个经过激光聚焦区 . 如果我们将细胞中感兴趣的部分 特异性地标上荧光染料 , 那么这些染料将在细胞通过激光检测区时受激发出特定 波长的荧光 , 通过一些波长选择通逶性的滤色片 , 我们可以将不同波长的散射光 , 荧光信号区分开来 , 并送到不同的光电配增管中 , 经过一系列信号转换 , 放大 , 数 字化处理 , 我们就可以在计算机上直观地统计染上各种荧光染料的细胞各自的百 分率 . 选择不同的单克隆抗体及荧光染料 , 我们可以利用流式细胞仪同时测定一 个细胞上的多个不同的特征 , 如果对具有某种特征的细胞有兴趣 , 我们还可以利 用流式的分选功能将其分选出来 , 以便于进一步培养 , 研究 二 . 流式细胞仪在免疫学中的应用 1. 淋巴细胞亚群分析 淋巴细胞是正常机体免疫系统功能最重要的一大细胞群 , 在免疫应答过程中 , 未 梢血淋巴细胞发育成为功能不同的亚群 . 各亚群的数量和功能了生异常时 , 就能 导致机体免疫紊乱并产生病理变化 .FCM可以同时检测一种或几种淋巴细胞细胞 表面抗原 , 将不同的淋巴细胞亚群数量的测定来监控病人的免疫状态 , 指导治疗 . 2. 感染及其治疗效果观察 由于 T 淋巴细胞在人体免疫系统中承担着重要的功能 , 因此 , 当感染发生时 ,T 淋 巴细胞各亚群的变化往往能很敏感地反映感染的状态与程度