不同提取方法对溪黄草抗氧化性的影响.docx

不同提取方法对溪黄草抗氧化性的影响 属唇科香茶植物，是一种多年生草本植物。据中华大辞典记载,溪黄草具有清热祛湿、凉血散瘀之功效,对急性肝炎、肠炎、痢疾等有较好效果。溪黄草含萜类、黄酮类、酚类、氨基酸等多种化学成分。酚类化合物具有较强的抗氧化性,研究表明其抗氧化性能减缓冠状动脉硬化、癌症和年龄相关的大脑退行性疾病,另还具有抗菌、抗炎和舒张血管的作用。鉴于多种慢性病及退行性疾病与体内的氧自由基过剩有关,因此从溪黄草中提取酚类化合物,并评价其抗氧化性强弱就显得非常有必要。 常压回流提取法能高效快速从天然产物中提取有效成分,因此天然产物有效成分提取普遍采用常压回流提取法。回流提取法常采用水、乙醇或水-乙醇作为提取剂,而水、乙醇的沸点又较高,高温对于天然产物中热敏性物质是一种威胁。减压回流提取法通过改变体系真空度有效降低提取溶剂的沸点,热敏性物质不会被高温破坏,且提取过程在真空条件下进行,提取物不会被氧气所氧化。另外,真空条件下,溶剂能在低温下保持沸腾和回流,有利于物料与溶剂的混合及有效成分的溶出。 本文对比了常压回流提取法与减压提取法得到的溪黄草不同溶剂提取物总酚,黄酮,单宁提取率,并用DPPH·清除能力及铁氰化钾还原力作指标评价了抗氧化性强弱。 1 材料和方法 1.1 yl-1-picryl及其他 溪黄草,购于广州万怡药房五山店,广东产。 DPPH·(2,2-Diphenyl-1-picrylhydrazyl):Sigma公司;磷酸二氢钠,磷酸氢二钠,无水乙醇,丁醇,乙酸乙酯,铁氰化钾,三氯乙酸,氯化铁,无水碳酸钠,钨酸钠,钼酸钠,磷酸,浓盐酸,硫酸锂,溴水,没食子酸,芦丁,均为分析纯。 1.2 方法 1.2.1 样品溶液的制备 1.2.1. 提取贮备液制备 水提取物:称取5.0 g溪黄草(粉碎过80目筛),按料液比1:20(g:m L)添加100 m L水,调节真空度0.095 MPa,55℃减压回流2 h,55℃浓缩至干,用60%乙醇定容至50 m L,制成水提取物贮备液; 乙酸乙酯提取物:称取5.0 g溪黄草(粉碎过80目筛),按料液比1:20(g:m L)添加100 m L乙酸乙酯,调节真空度0.095 MPa,30℃减压提取(微沸状态)2h,35~40℃浓缩至干,用60%乙醇定容至50 m L,制成乙酸乙酯提取物贮备液; 60%乙醇提取物:称取5.0 g溪黄草(粉碎过80目筛),按料液比1:20(g:m L)添加100 m L 60%乙醇,调节真空度0.095 MPa,33℃减压回流2 h,40~45℃浓缩至干,用60%乙醇定容至50 m L,制成60%乙醇提取物贮备液; 丁醇提取物:称取5.0 g溪黄草(粉碎过80目筛),按料液比1:20(g:m L)添加100 m L丁醇,调节真空度0.095 MPa,66℃减压回流2 h,65~75℃浓缩至干,用60%乙醇定容至50 m L,制成丁醇提取物贮备液。 1.2.1. 乙酸乙酯提取物贮备液的制备 水提取物:称取5.0 g溪黄草(粉碎过80目筛),按料液比1:20(g:m L)添加100 m L水,100℃回流2h,55℃浓缩至干,用60%乙醇定容至50 m L,制成水提取物贮备液; 乙酸乙酯提取物:称取5.0 g溪黄草(粉碎过80目筛),按料液比1:20(g:m L)添加100 m L乙酸乙酯,80℃回流2 h,35~40℃浓缩至干,用60%乙醇定容至50 m L,制成乙酸乙酯提取物贮备液; 60%乙醇提取物:称取5.0 g溪黄草(粉碎过80目筛),按料液比1:20(g:m L)添加100 m L 60%乙醇,80℃回流2 h,40~45℃浓缩至干,用60%乙醇定容至50 m L,60%乙醇提取物贮备液; 丁醇提取物:称取5.0 g溪黄草(粉碎过80目筛),按料液比1:20(g:m L)添加100 m L丁醇,114℃回流2 h,65~75℃浓缩至干,用60%乙醇定容至50 m L,制成丁醇提取物贮备液。 1.2.2 抗氧化性评价 1.2.2. dpph清除率测定 参考Wei Luo等人的方法,并作适当修改。吸取样品待测液将不同提取方法不同溶剂制备的提取物贮备液做适当稀释,每个样品至少做5个稀释度,便于计算各提取物贮备液EC50值)2.0 m L,加入0.2mmol/L DPPH·溶液2.0 m L,摇匀,放置30 min。以无水乙醇调零,测定517 nm处的吸光度A样品。测定样品待测液2.0 m L与无水乙醇2.0 m L混合液在517nm处的吸光度A对照,再测定2.0 m L DPPH·溶液与2.0 m L无水乙醇在517 nm处的吸光度A空白。DPPH清除率按以下公式计算。EC50值为自由基清除率达到50%时的样品浓度。 1.2.2. 含量测定 参考Dina Atm