蛋白质的理化性质分析报告.ppt

上节课内容回顾 1.蛋白质分子结构 一级结构 二级结构 三级结构 四级结构 2.蛋白质结构和功能的关系 第三节 蛋白质的理化性质 （一）蛋白质的两性解离与等电点 1. 蛋白质是两性电解质 一、蛋白质分子中可解离的基团 多肽两端游离的α-氨基和α-羧基 多肽侧链R上解离的基团 二、决定蛋白质解离成正负离子的因素 蛋白质所含酸性和碱性基团的数目 蛋白质所在溶液的PH值 练习 下列哪种蛋白质在pH5.0的溶液中带负电荷？ A．pI为5.5的蛋白质　　 　 B．pI为4.0的蛋白质C．pI为7.0的蛋白质　　　 D．pI为5.0的蛋白质 二、蛋白质的胶体性质 1.蛋白质有胶体性质 蛋白质是生物大分子，分子量在1万～10万kD（千道尔顿）之间，分子直径在胶体颗粒的范围（1—100nm） 因此，蛋白质具有胶体的性质。 练习 盐析法分离蛋白质的原理是： A．破坏蛋白质的一级结构 B．破坏水化膜及中和电荷 C．破坏蛋白质的二级结构 D．使蛋白质变性沉淀 三、蛋白质的变性、沉淀和凝固 变性的概念 在某些物理或化学因素的作用下，蛋白质 特定的空间构象被破坏，从而导致其理化性质改 变和生物活性丧失，称为蛋白质的变性。 变性的实质 二硫键或非共价键断裂，空间结构破坏 ，不涉及一级结构的改变。 练习 变性蛋白质的主要特点是： A．黏度下降　 B．溶解度增加　　　 C．不易被蛋白酶水解 D．生物学活性丧失 蛋白质变性的应用 应用变性的因素进行消毒、灭菌。 保存生物制剂则要防止蛋白质变性。 核糖核酸酶的变性与复性示意图 蛋白质沉淀 概念 蛋白质从溶液中析出的现象称为沉淀。 方法 盐析法、有机溶剂的沉淀、重金属盐沉淀、生物碱试剂沉淀。 变性的蛋白质易于沉淀，但沉淀的蛋白质并不一定都变性。 如盐析。 练习 盐析法分离蛋白质的原理是： A．破坏蛋白质的一级结构 B．破坏水化膜及中和电荷 C．破坏蛋白质的二级结构 D．使蛋白质变性沉淀 练习 使蛋白质沉淀但不变性的方法有： A．中性盐沉淀蛋白质　　　 B．酸沉淀蛋白质C．乙醇沉淀蛋白质　　　 D．重金属盐沉淀蛋白质 蛋白质的凝固 加热使蛋白质变性并凝聚成块状称为凝固。 此凝块不溶于强酸或强碱中。 凝固实际上是蛋白质变性后进一步发展的不可逆的结果。 因此，凡凝固的蛋白质一定发生变性。 变性和沉淀的区别 变性不一定沉淀 沉淀也不一定变性 凝固一定变性 四、蛋白质的紫外吸收性质 蛋白质分子中含有酪氨酸和色氨酸等残基，具有紫外吸收能力。 在280nm处有最大吸收峰。 此特性常用于蛋白质含量的测定。 蛋白质的紫外吸收 五、蛋白质的呈色反应 一、双缩脲反应： 含有多个肽键的蛋白质和肽在碱性溶液中加热可与Cu离子作用生成紫红色内络盐。 可用于蛋白质、多肽的定量测定。 氨基酸无此反应，可用于检查蛋白质的水解程度。 双缩脲反应 五、蛋白质的呈色反应 二、茚三酮反应 三、Folin—酚试剂反应 练习 六、简答题 1、何谓蛋白质的变性？ 2、影响变性的理化因素有哪些？请举例说明。 正常 肝硬化 2.蛋白质亲水胶体稳定的因素 蛋白质分子表面的水化膜和同种电荷。 去掉两个稳定因素，则蛋白质从溶液中析出而产生沉淀。 3.蛋白质胶体性质的应用 透析： 用于分离纯化蛋白质 超速离心： 用于蛋白质的分离纯化及分子量的测定。 沉降系数（sedimentation coefficient,S) 指单位力场中的沉降速度 沉降系数与物质的分子量的大小、形状、密度及溶剂的密度高低有关。 分子量越大，颗粒越紧密，沉降系数越大。 变性蛋白质的特点 A.生物学活性丧失 B.溶解度降低，易于沉淀 （变性不一定沉淀） C.黏度增加 D.结晶能力消失 E.易被蛋白酶水解 引起变性的因素 物理因素 高温、高压、紫外线、电离辐射、超声波等。 化学因素 强酸、强碱、有机溶剂、尿素、重金属盐等。 蛋白质的复性 大多数蛋白质变性后，空间构象严重破坏，不能恢复其天然状态，称为不可逆性变性； 若蛋白质变性程度较轻，去除变性因素，有些可恢复