第十二章单克隆抗体方案.ppt

二、动物细胞代谢 葡萄糖和谷氨酰胺提供能量和合成代谢的前体 葡萄糖 受限 谷氨酰胺 谷氨酰胺：氮源，受限，消耗其他氨基酸 葡萄糖代谢：进入糖酵解途径，大部分分解为丙酮酸 乳酸，分泌到胞外（积累） 丙酮酸还可以转化为乙酰辅酶A，进入TCA循环，彻底氧化为CO2和水 4%-8%的少部分葡萄糖进入五糖磷酸途径PPP，转化为4、5、7碳糖和NADPH. 5碳糖用 于核酸合成，其他中间产物进入脂肪酸代谢、核酸代谢和氨基酸代谢。 葡萄糖代谢旺盛，产生大量乳酸，产生细胞毒性。 三、动物细胞的分类 原代细胞（primary cell):从动物体内直接分离得到的细胞 特点：生长分裂不旺盛，与体内细胞相似 传代细胞（passage cell):原代细胞转接后培养的细胞 特点：分裂增殖旺盛 二倍体细胞系（diploid cell): 原代细胞经过传代、筛选、克隆、 纯化后，获得的具有一定特征的细胞系。 如：W1-38,MRC-5,ZBS等 有限细胞系(finite cell):生长和寿命有限的细胞系，二倍细胞系 特点：多次传代培养，失去增殖能力，老化死亡（寿命取决于细 胞来源的物种、年龄和器官） 人细胞： 50-60代， 胚成纤细胞：人 50代；鸡胚 30代；小鼠 8代 第四节 抗HBsAg的单克隆抗体生产工艺 抗乙型肝炎表面抗原（HBsAg）单克隆抗体—专一性识别HBsAg的单一抗体。 临床上用于检测乙型肝炎病毒的感染并用于生产预防乙肝的免疫制剂。 生产技术：基因工程、细胞工程 一、工艺流程 二、工艺过程及控制要点 RPMI1640 （1）培养基 瘤细胞IR983干细胞系 (DMEM)培养基 改良的Dulbecco’s Eagle :15种AA,浓度升高1倍，8种维生素,增加3倍。 即：（mg/L）:L-盐酸Asg42，L-cys24，L-Asn584， L-盐酸His19，L-zle52， L-Leu52，L-盐酸Lys72，L-Met15，L-Phe36， L-Thr48，L- 色氨酸8，L-酪氨酸36，L-缬氨酸48，氯化胆碱，叶酸3， 肌醇6，烟酸3，泛酸钙3，盐酸吡哆醛3，核黄素0.3，硫胺素3 ，生物素3，NaCl 6800，KCl 400，CaCl2 200，MgSO4·7H2O 200， NaH2PO4·2H2O 150，NaHCO3 2000，Glucose 1000。 青霉素100U/ml，链霉素100U/ml，50mg/mL庆大霉素 10%小牛血清， 1%非必需氨基酸,0.1mol/L丙酮酸钠，1%谷氨酸胺， 改良的Dulbecco’s Eagle 杂交瘤细胞筛选：含HAT的DMEM培养基 （2）饲养细胞 大鼠腹