植物油中磷脂含量的测定.ppt

*项目五植物油中磷脂含量的测定食品分院刘深勇主要内容实验目的掌握用油脂中磷脂测定的原理和方法。学习吸收曲线的制作和结果计算。进一步熟练掌握分光光度计的使用方法。磷脂的定义实验原理植物油脂中的磷脂经灼烧成五氧化二磷，被热盐酸变成磷酸，遇钼酸钠生成磷钼酸钠，用硫酸联氨还原形成钼蓝，在680nm，用分光光度法测定其含量。磷脂测定仪器和器具添加标题钼蓝比色法添加标题移液管：5、10ml；添加标题瓷坩埚或石英坩埚；添加标题电炉、高温炉；添加标题分光光度计或带塞的50ml比色管；添加标题容量瓶：100、500、1000ml；添加标题表面皿、烧杯、量筒；添加标题恒温水浴锅；添加标题漏斗、坩埚钳、试剂瓶等磷脂测定的试剂50％氢氧化钾溶液；盐酸、硫酸、氧化锌、滤纸；0.015％硫酸联氨溶液；2.5％钼酸钠稀硫酸溶液：量取140ml硫酸注入300ml水中，摇匀，冷却至室温，加入12.5g钼酸钠，溶解后加水至500ml，摇匀，静置24h备用。磷标准溶液：称取无水的磷酸二氢钾0.4391g溶于1000ml水中，作为1号液，含磷0.1mg/ml，吸取1号液10ml，加水稀释至100ml，含磷0.01mg/ml，作为2号液，比色用。操作步骤绘制标准曲线：取4只50ml比色管，编成1，2，4，8五个号码，按号码顺序分别注入磷标准2号液1，2，4，8ml，再按顺序分别加水9，8，6，2ml。接着向4只管内各加0.015％硫酸联氨溶液8.0ml；各加钼酸钠稀硫酸溶液2.0ml，加塞、摇匀。去塞，将4只管置于正在沸腾的水浴中加热10min，取出冷却至室温，用水稀释至50ml，充分摇匀，静置10min后，用分光光度计在波长650nm下，用1cm液槽，用水调整零点，分别测定吸光度值。以吸光度为纵坐标，以磷量（0.01、0.02、0.04、0.08mg）为横坐标绘制标准曲线。操作步骤制备被测液：用坩埚称取试样约10g（准确至0.001g），加氧化锌0.5g（氧化锌在灰化中能和磷形成磷酸锌防止磷以氧化物的形式挥发造成损失），先在电炉上加热炭化，然后送入550～600℃的高温炉中灼烧至灰化（白色），灼烧时间约1h，取出坩埚冷却至室温，用热盐酸（1∶1）10ml溶解灰分，并加热微沸5min，将溶解液过滤注入100ml容量瓶中，用热水冲洗坩埚和滤纸，待滤液冷却至室温后，用50％氢氧化钾溶液中和至出现混浊，缓慢滴加盐酸使氧化锌沉淀全部溶解后，再滴2滴，最后用水稀释至刻度，摇匀。操作步骤比色：用移液管吸取被测液10ml注入50ml比色管中，加入0.015％硫酸联氨8.0ml，加2.0ml钼酸钠稀硫酸溶液，加塞，摇匀。去塞，将比色管置于正在沸腾的水浴中加热10min，取出冷却至室温，用水稀释至50ml，充分摇匀，静置10min后，用分光光度计在波长650nm下，用1cm液槽，用水调整零点，测定吸光度值。*