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一种表达非洲猪瘟病毒三基因缺失重组伪狂犬病毒毒株、构建方法及其应用

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一种表达非洲猪瘟病毒三基因缺失重组伪狂犬病毒毒株、构建方法及其应用

摘要：本文旨在研究一种表达非洲猪瘟病毒三基因缺失重组伪狂犬病毒毒株的构建方法及其应用。首先，通过基因工程技术，构建了缺失非洲猪瘟病毒三基因的重组伪狂犬病毒载体。其次，利用该载体感染猪细胞，成功获得了表达非洲猪瘟病毒三基因缺失重组伪狂犬病毒毒株。最后，通过动物实验，验证了该毒株在猪体内的感染性和致病性。本研究为非洲猪瘟病毒的研究和防控提供了新的思路和方法。关键词：非洲猪瘟病毒；伪狂犬病毒；三基因缺失；重组病毒；感染性；致病性。

前言：非洲猪瘟（AfricanSwineFever,ASF）是一种高度传染性病毒性疾病，对全球养猪业造成了巨大的经济损失。目前，非洲猪瘟病毒（ASFV）的防治手段有限，疫苗研发仍处于初步阶段。伪狂犬病毒（PseudorabiesVirus,PRV）是一种单链负链DNA病毒，与非洲猪瘟病毒具有相似的病毒结构。本研究通过基因工程技术，构建了一种表达非洲猪瘟病毒三基因缺失重组伪狂犬病毒毒株，旨在为非洲猪瘟病毒的防控提供新的策略。

一、1.非洲猪瘟病毒与伪狂犬病毒的研究背景

1.1非洲猪瘟病毒的研究现状

(1)非洲猪瘟病毒（AfricanSwineFeverVirus，ASFV）自1957年在非洲首次发现以来，已成为全球养猪业的一大威胁。该病毒能够感染所有家猪品种，并可通过多种途径传播，如直接接触、间接接触、媒介昆虫等。尽管非洲猪瘟病毒已在全球多个国家和地区传播，但目前尚无有效的治疗方法。随着全球猪瘟疫情的加剧，非洲猪瘟病毒的研究引起了广泛关注。

(2)近年来，研究人员对非洲猪瘟病毒的结构、生命周期、致病机制等方面进行了深入研究。研究表明，ASFV属于非洲猪瘟病毒科（Aujeszkyiella属），具有复杂的基因组结构和多样的病毒株。病毒粒子呈圆形，直径约200纳米，含有单链DNA基因组。病毒进入宿主细胞后，通过病毒编码的蛋白质调控细胞周期，最终导致细胞死亡。然而，目前对于ASFV的致病机制尚不完全清楚，这为非洲猪瘟的防控带来了挑战。

(3)非洲猪瘟病毒的研究现状主要集中在以下几个方面：首先，对病毒基因组进行测序和变异分析，以揭示病毒在不同宿主和环境中的适应性变化；其次，研究病毒与宿主细胞的相互作用，解析病毒感染过程中的关键步骤；最后，探索非洲猪瘟病毒的诊断和疫苗研发策略。尽管取得了一定的成果，但非洲猪瘟病毒的防控仍然面临着诸多困难，如病毒变异快、传播途径复杂等。因此，加强非洲猪瘟病毒的研究对于全球养猪业的可持续发展具有重要意义。

1.2伪狂犬病毒的研究现状

(1)伪狂犬病毒（PseudorabiesVirus，PRV）是一种单链负链DNA病毒，主要感染家畜和野生动物，对人也有潜在的致病风险。自19世纪末以来，伪狂犬病毒在全球范围内广泛传播，已导致大量家畜死亡。近年来，随着分子生物学和病毒学研究的深入，对PRV的认识不断加深。据估计，全球每年因伪狂犬病毒造成的经济损失高达数十亿美元。研究显示，PRV具有高度变异性，其基因组的变异频率较高，这使得疫苗研发和防控工作面临挑战。例如，在美国，PRV的疫苗接种覆盖率约为90%，但仍存在一定比例的猪群感染。

(2)伪狂犬病毒的研究主要集中在病毒的结构、生命周期、致病机制、传播途径以及疫苗和治疗方法等方面。研究表明，PRV基因组包含约150个基因，编码多种病毒蛋白，这些蛋白在病毒感染过程中发挥重要作用。例如，PRV的G基因编码的糖蛋白在病毒吸附和进入宿主细胞过程中起关键作用。此外，PRV的N基因编码的核衣壳蛋白，对病毒的复制和组装至关重要。在传播途径方面，PRV可通过直接接触、呼吸道传播和消化道传播等多种途径传播。例如，2017年，我国某地区发生一起由伪狂犬病毒引起的疫情，导致数万头猪只死亡。

(3)针对伪狂犬病毒的防控，全球各国科研人员开展了大量的疫苗研发工作。目前，国内外已有多款PRV疫苗上市，如猪伪狂犬病灭活疫苗、猪伪狂犬病弱毒疫苗等。这些疫苗在降低猪群感染率和死亡率方面取得了显著成效。然而，由于PRV的变异，一些疫苗的免疫效果受到一定程度的影响。因此，研究人员正致力于开发新型疫苗，以应对病毒变异带来的挑战。例如，我国某科研团队成功研发了一种基于基因工程技术的PRV疫苗，该疫苗具有更强的免疫原性和更广的适用性。此外，针对PRV的治疗方法也在不断探索中，如干扰素、抗病毒药物等，但这些治疗方法的效果仍有待进一步验证。

1.3非洲猪瘟