家蚕30kD载脂蛋白19G1的表达和功能的初步的研究.pdf

摘 要 30K蛋白家族是一类在氨基酸组成及免疫学活性上相似的蛋白，分子量约为 30kDt埘。家蚕30K蛋白是由脂肪体合成的非雌特异性脂蛋白，表达受保幼激素 的调节，是生长发育过程中主要储藏蛋白之一，是五龄幼虫及蛹主要的蛋白组分， 主要分布在血淋巴中【3】。对雌性家蚕，30K蛋白还是卵黄原蛋白的重要组成部分 I-Ijt4j 【3】。30K蛋白中研究比较多的是30kD载脂蛋白6G1和19G1。KimEJtl】与Park 分别把家蚕30Kc6基因构建入表达载体在大肠杆菌中表达得到重组蛋白，纯化后 添加到哺乳动物及昆虫细胞培养基中，能抑制哺乳动物及昆虫细胞的凋亡；Koo 基因的表达抑制细胞的凋亡并提高干扰素的产量。 kD 本研究从家蚕蛹cDNA文库中通过生物信息学分析发现一条低分子量30 molecularmass30kD 19G1 载脂蛋白19G1前体(10w precursor)的EST lipoprotein 内含子，由长为771 bp的单一外显子编码256个氨基酸残基的蛋白质，预测分子 量约为29．5 中，构建重组质粒，双酶切鉴定及序列测定正确后转化大肠杆菌BL21(DE3)， 经IPTG诱导表达的重组蛋白以包涵体形式存在，经过镍柱亲和层析纯化后获得 高纯度的目的蛋白，以该重组蛋白作为抗原免疫新西兰大白兔制备多克隆抗体， 经ELISA检测，抗体效价可达1：12800，Western blotting结果显示抗体的特异性 较好。 提取家蚕各个时期和五龄幼虫各组织的总RNA分别进行荧光定量PCR分析 结果表明，家蚕发育时期在蛹期转录水平最高，卵中最低；五龄幼虫时期在脂肪 体中转录水平较高，丝腺和肠较低。提取家蚕各发育时期以及家蚕五龄幼虫各组 肪体、卵巢表达较高。 kD载脂蛋白 把纯化的蛋白添加到家蚕Bm5细胞培养基中，结果表明重组30 19G1能抑制化学试剂(地塞米松)诱导的家蚕Bm5细胞的凋亡。 RT-PCR kD载脂蛋白19G1； 关键词：家蚕；30K蛋白；低分子量30 Abstract The30K have proteingroup commoncharacteristicsinaminoacid and composition immunologicalarea of related withamolecularmassof activity．Theygroupstructurally proteins 30kD．30K are notfemale are in approximatelyproteins specificlipoproteins，whichsynthesized 恤fat of wasfoundthat bodysilkworm．Furthermore，it