【2017年整理】各种培养基的配置及注意事1.doc

各种培养基的配置及注意事项 6-BA配置： 配置时要加入少量稀酸或97%酒精，再加入蒸馏水，可适当加热。 IBA配置： 配置时要加入少量稀碱，再加入蒸馏水。 注意： 配这两种溶液时，若直接加蒸馏水，则不溶。（注：溶解生长素时，可用少量0.5~1N的NaOH或95%酒精溶解；溶解分裂素类用0.5~1N的HCl加热溶解，如再加蒸馏水，易产生白色沉淀，此时再加热水。） 母液配置： 母液 配置量 药品名称 称取量 倍数 母液1① 250ml NH4NO3 KH2PO4 41.5g 4.25g 100× 母液1② 250ml KNO3 CaCl2.2H2O 47.5g 11g 100× 母液1③ 250ml MgSO4.7H2O 9.25g 100× 母液2 500ml MnSO4.H2O ZnSO4.7H2O CaCl2.6H2O CuSO4.5H2O Na2MoO4 KI H3BO3 535mg 215mg 0.625mg 0.625mg 6.25mg 20.75mg 155mg 500× 母液3 250ml Na2.EDTA FeSO4.7H2O 932.5mg 695mg 100× 母液4 500ml 烟酸 VB6 VB1 肌醇 甘氨酸 12.5mg 12.5mg 2.5mg 2.5g 50mg 1000× MS固体培养基： 以配1LMS固体培养基为准： MS固体干粉 41.5g 蒸馏水 1L 2g/l的6-BA 2.5ml 2g/l的IBA 0.25ml 注意：待溶液配好后，用pH计将溶液的pH值调到5.8~ 6.0，煮沸至均匀无沉淀后，分装20小瓶（即50mL/瓶），灭菌之前盖子不要拧太紧，出锅后再拧紧盖子。 MS液体培养基： 以配1LMS液体培养基为准： 母液1① 5ml 母液1② 10ml 母液1③ 5ml 母液2 1ml 母液3 5ml 母液4 1ml 2g/l的6-BA 0.5ml 2g/l的IBA 0.1ml 蔗糖 30g 注意：待溶液在烧杯中混匀之后，转移到1000ml的容量瓶中定容。 LB液体培养基： 以配1LLB液体培养基为准： 蛋白胨（TRYPTONE） 10g 酵母提取液（YEASTExTrACT） 5g NaCl 10g 注意：粉末在烧杯中溶解完全之后，转移到1000ml的容量瓶中定容。待灭菌结束后，温度降至55℃左右（不烫手）时，加入Kana(50mg/L)1000Ul(在超净台内进行)。 LB固体培养基： 以配1LLB固体培养基为准： 蛋白胨（TRYPTONE） 10g 酵母提取液（YEASTExTrACT） 5g NaCl 10g 琼脂粉 15g 注意：粉末在烧杯中溶解完全之后，转移到1000ml的容量瓶中定容。待灭菌结束后，温度降至55℃左右（不烫手）时，加入Kana(50mg/L)1000Ul(在超净台内进行)。 在进行到平板。 组织培养体系的建立 外植体获得 具体操作： 将外植体（用镊子）夹到其中一个空培养罐中 倒入75%的酒精消毒30S，重复三次。 倒入升汞消毒4min，一次。 倒入蒸馏水清洗，重复三次。 盖上盖子，备用。 点燃酒精灯，在另一只空的培养罐中倒入些75%的酒精（用于铁制仪器消毒）。 将铁架子在酒精灯上进行消毒，镊子和手术刀浸入培养罐中，然后放在酒精灯上灼烧，起杀菌作用。 用镊子夹住一培养皿在酒精灯上稍微烫下，灭菌。 在培养皿中倒入少量的蒸馏水。 用经冷却的镊子将外植体夹到带少量蒸馏水的培养皿中，用刀切取其腋芽，将腋芽外的壳小心剥去，再在腋芽的尖端切一刀，使其暴露生长点。 打开培养基瓶子之前在酒精灯上稍微烫下，打开瓶盖后，瓶口在酒精灯上灼烧下，以防污染。 用镊子将腋芽植入培养基中，瓶口灼烧下，旋紧盖子。 注意：镊子和手术刀要经常灼烧，必要时可将镊子和刀