慢病毒载体介导绿色荧光蛋白基因转染大鼠卵巢的实验研究-生殖与避孕.PDF

第 32 卷第 6 期Vol.32, No. 6 生 殖 与 避 孕 http://www.RandC.cn 2012 年6 月Jun. 2012 Reproduction Contraception reproduction_journal@ 慢病毒载体介导绿色荧光蛋白基因转染 大鼠卵巢的实验研究 王继东 罗 爽 潘红娟 姚珍薇 (重庆医科大学附属第一医院妇产科, 重庆, 400016) 【摘要】目的: 探讨慢病毒载体介导绿色荧光蛋白基因体外转染卵巢颗粒细胞的有效性及在体 转染大鼠卵巢组织的最佳剂量及时效性。方法: 原代培养大鼠卵巢颗粒细胞, 慢病毒载体介导 绿色荧光蛋白基因(lenti-GFP)(MOI=20)体外转染颗粒细胞, 荧光显微镜下观察绿色荧光蛋白的 表达。通过显微注射方法将不同转染剂量低剂量(2×106 6 TU 病毒颗粒, A 组; 高剂量: 10×10 TU 病毒颗粒, B 组; 空白病毒载体, C 组; 空白对照组, D 组) 的lenti-GFP 在体转染大鼠卵巢组织。于 转染第5 日观察各剂量组卵巢组织切片的GFP 表达情况, 确定最佳转染剂量后, 分别于转染第 5 日、第15 日、第30 日、第45 日、第60 日、第75 日观察大鼠卵巢组织和全身其他组织器 官GFP 的表达。结果: 体外转染实验中, 在转染第5 日可以观察到颗粒细胞内有GFP 表达, 并 随着转染时间延长其表达量增多。体内转染大鼠卵巢第5 日, 不同剂量组大鼠卵巢均有明显GFP 表达; A 组与B 组卵巢组织切片荧光强度分别为0.231 ±0.020 及0.231 ±0.020; 组间差异无统 计学意义(P=0.976) 。以最佳转染剂量(2×106 TU 病毒颗粒)转染, 随转染时间的延长, GFP 的表 达量增加, 于转染第30 日时表达量达到峰值, 并可持续高效表达至第75 日(转染第5 日、第15 日、 第30 日、第45 日、第60 日、第75 日卵巢组织荧光强度值分别为0.231 ±0.020 、0.312 ± 0.021 、0.346 ±0.020 、 0.357 ±0.013 、0.350 ±0.013 及0.351 ±0.017) 。同时, 大鼠全身其 它组织器官均有GFP 的高效持续表达。结论: lenti-GFP 不仅可以在体外有效转染颗粒细胞, 并 且可以通过活体转染大鼠卵巢后, 在卵巢及其他组织器官均高效持续地表达。 关键词: 慢病毒载体; 绿色荧光蛋白(GFP); 基因转染; 颗粒细胞; 卵巢; 体外实验; 大鼠 中图分类号: R711.75, R711.51 文献标识码: A 文章编号: 0253-357X(2012)06-0366-06 在人类有很多疾病是一组症状的综合征, 如在 病的遗传基因, 可能会成为该类疾病治疗的一个突 我国有庞大患者群的多囊卵巢综合征, 就是一种常见 破。但是转基因载体对在体组织细胞的转染效率 的内分泌紊乱症候群。其病因及发病机制不清, 目 是转基因治疗首先需要弄清楚的问题。本研究以 前认为是遗传(如基因突变) 因素和环境因素共同作 绿色荧光蛋白(green fluorescence protein, GFP)基因 用的结果。如果能够通过转基因的方法适当干预发 作为报告基因, 以慢病毒载体(lentivirus vectors)作 为基因转染媒介, 从细胞和动物实验2 个水平, 探讨 本课题为重庆市卫生局医学科研重点项目, 项目号: 2011