99mTc标记CD24单克隆抗体在非小细胞肺癌荷瘤裸鼠中的放射免疫显像研究.pdf

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研究论文99mTc标记CD24单克隆抗体在非小细胞肺癌荷瘤裸鼠中的

放射免疫显像研究

前言8

材料与方法10

结果16

讨论23

结论26

参考文献27

综述CD24在肿瘤发展中的作用31

致谢45

个人简历47

中文摘要

99mTc标记CD24单克隆抗体在非小细胞肺癌荷瘤裸鼠中的放射

免疫显像研

摘要

目的：CD24作为潜在的新型免疫检查点，非小细胞肺癌中存在其高

表达。通过临床常用放射性核素99mTc标记CD24单克隆抗体（CD24

mAb），构建CD24靶标的放射性核素分子探针；分析其细胞摄取情况及

荷瘤裸鼠体内的放射性分布状况；并通过SPECT显像研究其无创探查恶

性肿瘤CD24表达水平的可行性。

方法：

1.筛选细胞系：通过Westernblot及流式细胞术检测A549细胞及

SW480细胞两种细胞系的CD24表达水平。

2.通过螯合剂SHNH作为中间连接体，连接CD24mAb和99mTc，得

到新型分子探针99mTc-SHNH-CD24mAb。经PD-10脱盐柱纯化后通过薄

层色谱测量放射性分子探针99mTc-SHNH-CD24mAb的放射化学纯度。

3.将99mTc-SHNH-CD24mAb与A549实验组、SW480对照组及A549

阻断组（提前1h在A549细胞中加入过量的CD24抗体进行孵育）细胞

一同孵育，测定不同细胞在0.5h、1h、2h、4h及6h时对99mTc-SHNH-CD24

mAb分子探针摄取值。

4.构建A549实验组、SW480对照组两组荷瘤鼠模型，经荷瘤鼠尾静

脉注射显像剂后6h、12h、24h时进行解剖，取出感兴趣器官及组织，称

重后使用γ计数仪测量放射性计数，研究其体内分布情况。

5.经尾静脉注射99mTc-SHNH-CD24mAb，实验组及对照组3h、6h、

12h、24h进行SPECT显像。

6.取A549及SW480荷瘤鼠肿瘤标本，解剖切片后进行免疫组化染

色，研究其CD24的表达水平。

结果：

1.WesternBlot及流式细胞术结果图显示，CD24在A549细胞中表达

明显高于SW480细胞。流式细胞术检测两组细胞的CD24表达率分别为

97.37±0.06%和1.60±0.17%（P＜0.001）。

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中文摘要

2.99mTc-SHNH-CD24mAb经过PD-10柱纯化后的放射性化学纯度为

95.18±2.63%。

3.细胞摄取实验中，前2h内A549细胞对99mTc-SHNH-CD24mAb的

摄取率随时间延长逐渐增高，2h时达到高峰，后摄取率开始降低。A549

实验组摄取率明显高于阻断组及对照组(P值均0.05)。

4.体内分布研究显示，6h、12h、24h三个时间点，A549实验组肿瘤

组织摄取值均明显高于对照组（P值均0.05）。

5.99mTc-SHNH-CD24mAbSPECT显像结果显示，A549实验组肿瘤组

织在6h时开始显影，并随时间延长逐渐增浓，12h可见肿瘤明显放射性

摄取，24h显影仍清晰，对照组肿瘤始终未见明显放射性摄取。

6.免疫组化

免疫组化结果显示A549肿瘤组织较SW480肿瘤组织表达CD24水

平更高。

结论：

1.非小细胞肺癌肿瘤细胞A549高表达CD24。

2.合成分子探