普通免疫学单克隆抗体.ppt

第101页,共121页，星期六，2024年，5月第102页,共121页，星期六，2024年，5月电泳迁移率：在特定介质中单位电场强度的带电颗粒电泳移动速度。电泳迁移率与颗粒所带电荷量成正比，与颗粒的半径和介质黏度成反比。实际工作中常用相对电泳迁移率，即两种带电颗粒在同一介质、同一电场中泳动距离之比。一般情况下电泳中蛋白质分子量对数与迁移率呈线性关系。第103页,共121页，星期六，2024年，5月问题单克隆抗体是如何制备的？什么是免疫共沉淀？Western杂交试验？第104页,共121页，星期六，2024年，5月(荧光醇)(过氧酸,-O-O-)第105页,共121页，星期六，2024年，5月放射免疫分析：第106页,共121页，星期六，2024年，5月免疫荧光分析:将荧光化合物标记抗体。需要激发，才能发出荧光。第107页,共121页，星期六，2024年，5月第108页,共121页，星期六，2024年，5月第109页,共121页，星期六，2024年，5月IRDyenearinfraredfluorescentdyesaresettingnewstandardsforproteinandcellularassays,microscopy,andinvivomolecularimaging.Thesedyeshaveexcellentwatersolubility,nearinfrared(700-800nm)emissionwavelengthswhereautofluorescenceislow,andminimalnon-specificbinding.UseIRDyeinfrareddyesforlabelingnucleicacids,antibodies,proteins,peptides,viruses,cytokinesandchemokineswheneveryouneedbrightsignal,lowbackgroundimaging.Li-COR第110页,共121页，星期六，2024年，5月第111页,共121页，星期六，2024年，5月第112页,共121页，星期六，2024年，5月第113页,共121页，星期六，2024年，5月第114页,共121页，星期六，2024年，5月ChiP-to-Chip（染色质免疫沉淀分析和芯片）第115页,共121页，星期六，2024年，5月染色质免疫沉淀分析

ChromatinImmunoprecipitationAssay,ChiP胶电泳迁移率改变分析（EMSA）是目前研究转录调控蛋白和相应核苷酸序列结合的常用方法，但是由于许多转录调控蛋白有相似或相同的DNA结合位点，这种体外分析获取的结果不一定能真实地反映体内转录调控蛋白和DNA结合的状况。

染色质免疫沉淀分析（ChiP）是基于体内分析发展起来的方法，它能真实、完整地反映结合在DNA序列上的调控蛋白，是目前确定与特定蛋白结合的基因组区域或确定与特定基因组区域结合的蛋白质的最好方法。

第116页,共121页，星期六，2024年，5月DNAbindingisreflectedinchangesinCy-5/Cy-3ratios.第117页,共121页，星期六，2024年，5月免疫共沉淀(co-immunoprecipitation)分离蛋白第69页,共121页，星期六，2024年，5月第70页,共121页，星期六，2024年，5月Identifyingspecificproteininteractionpartnersusingquantitativemassspectrometryandbeadproteomes第71页,共121页，星期六，2024年，5月2.免疫双扩散抗原抗体在半透明的半固相介质中进行沉淀实验。双扩散是在琼脂板中抗原和抗体分别从相邻的孔中向四周扩散，在抗原孔和抗体孔之间二者比例合适的部位形成沉淀线。当两个抗原完全一致时，两条沉淀线完全融合；如果两个抗原无共同抗原决定簇时，沉淀线互不干扰；当两个抗原只是部分抗原决定簇相同，还有其他不同的抗原决定簇，则沉淀线在后者一方形成突出的小刺第72页,共121页，星期六，2024年，5月3.免疫电泳利用蛋白质在凝胶中电泳迁移率不同能被分离开来的特点与免疫扩散结合一起进行分析的方法。第73页,共121页，星期六，2024年，5月1、血清免疫电