GB/T 13093-1991饲料中细菌总数的测定方法.pdf

中华人民共和 国国家标准 f 饲料中细菌总数的测定方法 GB13093一91 Methodfordeterminationofaerobic bacterialcountinfeeds 本标准参照采用国际标准ISO4833-1978食《品和动物饲料中微生物学检验方法》。 1 主肠内容与适用范围 本标准规定了饲料中细菌总数的测定方法。 本标准适用于饲料中细菌总数的测定。 2 原理 将试样稀释至适当浓度，用特定的培养基，在30士1℃下培养72士3h，计数平板中长出的菌落数，计 算每克试样中的细菌数量。 3 仪器、设备 3.1天平:感量为。.1B= 3.2 振荡器:往复式。 3.3 干热灭菌箱:50^-200士10C。 3.4 高压灭菌锅。 3.5 冰箱:普通冰箱。 3.6 恒温箱:30士1C。 3.7 电炉:可调式。 3.8 平皿:直径为9cm. 3.9 吸管:容量为1,10mL, 3.10 三角烧瓶:容量为250,500mL, 3.11 玻璃珠。 3.12 试管:18X180ram. 3.13 水浴锅:46士1C。 3.14 酒精灯。 3.15 试管架。 3.16 橡皮乳头。 4 检验程序 细菌总数的检验程序如下 国家技术监仔局1991一07一16批准 1992一04一01实施 GB13093一91 5 操作步骤 5.1 采样 采样时必须特别注意样品的代表性和避免采样时的污染。首先准备好灭菌容器和采样工具，如灭菌 牛皮纸袋或广口瓶，金属勺和刀，在卫生学调查基础上，采取有代表性的样品，样品采集后应尽快检验， 否则应将样品放在低温干燥处。 根据饲料仓库、饲料垛的大小和类型，分层定点采样，一般可分三层五点或分层随机采样，不同点的 样品，充分混合后，取500g左右送检，小量存贮的饲料可使用金属小勺采取上、中、下各部位的样品混 乙、 口 0 海运进口饲料采样:每一船仓采取表层、上层、中层及下层四个样品，每层从五点取样混合，如船仓 盛饲料超过10000t，则应加采一个样品。必要时采取有疑问的样品送检。 5.2 试样稀释及培养 5.2.1无菌称取试样10.0g，放人含有90mL稀释液的灭菌三角烧瓶内(瓶内预先加有适当数量的玻 璃珠)。经充分振摇，制1:10的均匀稀释液。最好置振荡器中以8000^10000r/min的速度处理2^-3 m5.in2.,2 用1mL灭菌吸管吸取1:10稀释液1mL,沿管壁慢慢注人含有9mL稀释液的试管内(注意吸管 尖端不要触及管内稀释液)，振摇试管，混合均匀，作成1:100的稀释液。 5.2.3 另取一支1mL灭菌吸管，按上述操作顺序，作1。倍递增稀释，如此每递增稀释一次，即更换一支 吸管。 5.2.4 根据饲料卫生标准要求或对试样污染程度的估计，选择2-3个适宜稀释度，分别在作10倍递增 稀释的同时，即以吸取该稀释度的吸管移1mL稀释液于灭菌平皿内，每个稀释度作两个平皿。 5.2.5 稀释液移入平皿后，应及时将凉至46士1℃的平板计数用培养基(可放置46士1℃水浴锅内保温) 注入平皿约15mL，小心转动平皿使试样与培养基充分混匀。从稀释试样到倾注培养基之间，时间不能 超过15min, 如估计到试样中所含微生物可能在琼脂平板表面生长时，待琼脂完全凝固后，可在培养基表面倾注 GB13093一91 凉至46土1C的水琼脂培养基4mLe 5.2.6 待琼脂凝固后，倒置平皿于30士1℃恒温箱内培养72士3h取出，计数平板内菌落数目，菌落数 乘以稀释倍数，即得每克试样所含细菌总数。 5.3 菌落计数方法 作平板菌落计数时，可用肉眼观察，必要时借助于放大镜检查，以防遗漏。在计数出各平板菌落数 后，求出同一稀释度两个平板菌落的平均数。 菌落计数的报告 选取菌落数在30-300之间的平板作为菌落计数标准。每一稀释度采用两个平板菌落的平均数，如 两个平板其中一个有较大片状菌落生长时，则不宜采用，而应以无片状菌落生长的平板作为该稀释度的 菌落数，如片