GB/T 13087-1991饲料中异硫氰酸酯的测定方法.pdf

中华人 民共和 国国家标准 饲料中异硫氮酸醋的测定方法 GB13087一91 Methodfordeterminationofisothiocyanates infeeds ，主题内容与适用范困 本标准规定了配合饲料和菜籽饼粕中异硫氰酸醋的测定方法。 本标准适用于配合饲料(包括混合饲料)和菜籽取油后的饼粕中异硫氰酸醋的测定 。 第一篇 气相色谱法 2 原理 配合饲料中存在的硫葡萄搪昔，在芥子酶作用下生成相应的异硫氰酸酷，用二氯甲烷提取后再用气 相色谱进行测定。 3 试剂和溶液 除特殊规定外，本标准所用试剂均为分析纯，水为蒸馏水或相应纯度的水。 3.1二氯甲烷或氯仿(GB682). 3.2 丙酮(GB686), 3.3pH7缓冲液:市售或按下法配制。量取35.3mLO.1mol/L柠檬酸(C6He0cH20)溶液，置入200mL 定容瓶中，用0.2mol/L磷酸氢二钠(Na2HPO,12H20,GB1263)稀释至刻度，配制后检查pH值。 3.4 无水硫酸钠。 15 酶制剂:将白芥(SinapisalbaL.)种子((72h内发芽率必须大于85 ，保存期不超过两年)粉碎 后，称取100g，用300mL丙酮(3.2)分10次脱脂，滤纸过滤，真空干燥脱脂白芥子粉，然后用400mL水 分两次提取脱脂粉中的芥子酶，离心，取上层混悬液体，合并，于合并混悬液中加入400mL丙酮(3.2)沉 淀芥子酶，弃去上清液，用丙酮(3.2)洗沉淀5次，离心，真空干燥下层沉淀物，研磨成粉状，装入密闭容器 中，低温保存备用，此制剂应不含异硫氰酸醋。 3.6 丁基异硫氰酸酷内标溶液:配制0.100mg/mL丁基异硫氰酸酷CCH,(CH2),NCS〕二氯甲烷或氯 仿((3.1)溶液，贮于4C，如试样中异硫氰酸酷含量较低，可将上述溶液稀释，使内标丁基异硫氰酸醋峰面 积和试样中异硫氰酸酷峰面积相接近。 4 仪器、设备 4 1 气相色谱仪:具有氢焰检测器。 4 2 氮气钢瓶:其中氮气纯度为99.99000 4 3 . 微量注射器:5pL, 4 4 分析天平:感量。.0001g. 国家技术监督局1991一07门6批准 1992一04一01实施 GB13087一91 4.5 实验室用样品粉碎机。 4.6 振荡器(往复，200次/min). 4.7 具塞锥形瓶，25mLe 4.8 离心机。 4.9 离心试管:10ml,. 5 试样制备 采集具有代表性的配合饲料样品，至少2kg，四分法缩分至约250g，磨碎，过1mm孔筛，混匀，装入 密闭容器，防止试样变质，低温保存备用。 6 测定步获 6.1 试样的酶解 称取约2.2g试样于具塞锥形瓶((4-7)中，精确到0.001g，加入5mLpH7缓冲液((3.3),30mg酶制 剂((3.5),10mL丁基异硫佩酸醋内标溶液(3.6)，用振荡器((4-6)振荡2h，将具塞锥形瓶(4-7)中内容物 转入离心试管((4-9)中，离心机((4-8)离心，用滴管吸取少量离心试管((4-9)下层有机相溶液，通过铺有少 量无水硫酸钠(3-4)层和脱脂棉的漏斗过滤，得澄清滤液备用。 6.2 色谱条件 6.2-1色谱柱:玻璃，内径3mm，长2m, 6.2.2 固定液:20%FFAP(或其他效果相同的固定液). 6.2.3载体:ChromosorbW,HP,80-100目(或其他效果相同的载体)。 6.2.4 柱温:loo0C。 6.2.5 进样口及检测器温度:1500C, 6.2.6载气(氮气)流速:65mL/min, 6.3 测定 用微量注射器((4.3)吸取1一2pL上述澄清滤液，注入色谱仪，测量各异硫氛酸酷峰面积。 7 测定结果 不 ， 计算公式 刀孟e x = 115.19XS,X石C(4/3X99.15XS,)+(4/4X113.18XSO 十 (4/5X127.21XS,))X1000 ，月.