药品微生物限度检查方法介绍.ppt

气雾剂，将供试品置冰箱（4--8℃）1h，取出，用碘伏棉球（也可用乙醇棉球）擦拭试品开启部位周围，然后以无菌钢锥钻孔并插入容器中，勿移出钢锥，以转动方式使容器抛射剂全部抛出。以无菌注射器吸出全部溶液，按标示量补加稀释剂至足量（若含非水溶性成分，加适量无菌聚山梨酯—80液）此液即为供试品原液。茶剂，取供试品10g，置灭菌锥形瓶中，加入稀释剂至100ml，振摇30s,以灭菌纱布过滤，（如为袋泡茶，可直接取2袋，以称样结果按1：10加稀释剂，浸泡30min）。膜剂将药膜剪成碎片，置灭菌锥形瓶中，加入稀释剂至100ml，于45℃±1℃水浴中保温，振摇使溶。以上供试品如吸水膨胀，或粘度过高，可增加稀释剂，制成1:20—1:100供试液。供试液的制备供试品溶液的制备（5）（含抑菌成分的供试品）

稀释法：10ml供试液种入较大体积的培养基中，一般不超过1000ml离心沉淀法：3000rpm，30min，底部2ml稀释至10ml。500rpm,5min，上清液再离心集菌薄膜过滤法：0.45um的滤膜，冲洗3次，每次至少100ml中和法：磺胺类100ml增菌液中含1%的对氨基苯甲酸1ml砷、汞类100ml硫乙醇酸盐培养基洗必泰类100ml增菌液中加适量的聚山梨酸80等表面活性剂沉降法：自然沉降5min，取上层液置100ml增菌液中供试液的稀释（10倍递增稀释法）*10g100ml1:101ml10ml1:1001ml10ml1:1000至少3个稀释级，每递增1个稀释级，必须更换吸管。管内混合吹打不少于10次，吸液在液面下2.5cm处，放液在液面上1cm处，延内壁缓缓吹出全部溶液，然后将吸管放入消毒液缸内。注平皿*在进行10倍递增稀释的同时，以该稀释级吸管，吸取各种稀释液各1ml至每个灭菌平皿中（从高稀释级至低稀释级吸液时可用1支吸管），每一稀释级注2-3个平皿（此时一般为左手执平皿，将盖半开，右手执吸管），注平皿时，将1ml供试液慢慢全部注入平皿中，管内无残留液体，防止反流到吸管尖端部。同时作阴性对照（待各级稀释液注皿完毕后，用1支1ml吸管取稀释剂各1ml，分别注入4个平皿中。其中2个作细菌数阴性对照；另2个作霉菌、酵母菌数阴性对照，如另用YPD琼脂测定酵母菌数时，则再增加2个平皿作酵母菌数阴性对照。倒培养基摇合*将预先配制好的培养基（细菌计数用营养琼脂、霉菌、酵母菌计数一般用玫瑰红钠琼脂，含蜂蜜、王浆液体制剂另用YPD琼脂）熔化、冷至约45℃时，倾注上述各个平皿约15ml，以顺时针或反时针方向快速旋转平皿混匀，注意，混匀时切勿将培养基，溅到皿边及皿盖上，置操作台上待凝。倒置培养*培养细菌计数平板倒置于30-35℃培养箱中培养48h。01霉菌、酵母菌计数平板倒置于23-28℃培养箱中培养72h。02菌落计数*细菌数选取平均菌落数在30—300之间的稀释级。霉菌、酵母菌数先取平均菌落数在30—100之间的稀释级。因为超过300有凝聚作用，易计数偏低，且不易点计，低于30细菌分布不是正态分布，不能代表其正常计数，且数量减少，误差增大。菌落报告原则*稀释菌落数平均值报告－22928如只有1个稀释级平均菌落数在30—300（30--100）之间，则将该稀释级的菌落乘以稀释倍数报告。－1280260270270×10＝2700－332如有2个相邻稀释级平均菌落数在30—300（30--100）时，则按比值计算。当比值≤2时，则以2个稀释级的平均菌落数均值报告。高稀释级平均菌落数×稀释倍数比值=低稀释级平均菌落数×稀释倍数稀释菌落数平均值10－1大于300（无法计数）10－2