固相萃取柱知识点.docx

1、 使用阳离子固相萃取柱前为什么要 用甲醇和水活化 要是使用的是高聚物基质的阳离子柱，可直接上样，不用活化， 要是使用的是硅胶基质的阳离子柱，活化是为了打开键合在硅胶上 的碳基团链，使之充分发生作用，甲醇是为了与碳链互溶，用水过 度是为了能和样品溶液相溶。 2、固相萃取技术原理及应用 一、固相萃取基本原理与操作 1、固相萃取吸附剂与目标化合物之间的作用机理 固相萃取主要通过目标物与吸附剂之间的以下作用力来保留/吸附的 1）疏水作用力：如 C18、C8、Silica、苯基柱等 2）离子交换作用：SAX, SCX，COOH、NH  2  等 3）物理吸附：Florsil、 Alumina 等 2、p H 值对固相萃取的影响 pH 值可以改变目标物/吸附剂的离子化或质子化程度。对于强阳/阴离 子交换柱来讲，因为吸附剂本身是完全离子化的状态，目标物必须完 全离子化才可以保证其被吸附剂完全吸附保留。而目标物的离子化程 度则与 pH 值有关。如对于弱碱性化合物来讲，其 pH 值必须小于其 p Ka 值两个单位才可以保证目标物完全离子化，而对于弱酸性化合物， 其 pH 值必须大于其 pKa 值两个单位才能保证其完全离子化。对于弱 阴/阳离子交换柱来讲，必须要保证吸附剂完全离子化才保证目标物的 完全吸附，而溶液的 pH 值必须满足一定的条件才能保证其完全离子化 。 3、固相萃取操作步骤及 注 意 事 项 针对填料保留机理的不同（填料保留目标化合物或保留杂质），操作 稍有不同。 1）填料保留目标化合物 固相萃取操作一般有四步（见图 1）： ?  活化---- 除去小柱内的杂质并创造一定的溶剂环境。（注意整 个过程不要使小柱干涸） ?  上样---- 将样品用一定的溶剂溶解，转移入柱并使组分保留在 柱上。（注意流速不要过快，以 1ml/min 为宜，最大不超过 5ml/min） ?  淋洗---- 最大程度除去干扰物。（建议此过程结束后把小柱完 全抽干） ?  洗脱---- 用小体积的溶剂将被测物质洗脱下来并收集。（注意 流速不要过快，以 1ml/min 为宜） 如下图 1: 2）填料保留杂质 固相萃取操作一般有三步（见图 2）： ?  活化--除去柱子内的杂质并创造一定的溶剂环境。（注意整个 过程不要使小柱干涸） ?  上样--将样品转移入柱，此时大部分目标化合物会随样品基液 流出，杂质被保留在柱上，故此步骤要开始收集（注意流速不要过快 ） ?  洗脱---用小体积的溶剂将组分淋洗下来并收集，合并收集液。 （注意流速不要过快） 此种情况多用于食品或农残分析中去除色素。 如下图 2： 二、固相萃取方法的建立与优化 固相萃取技术使用起来虽然比液液萃取简单，但建立一个固相萃取的方法并无快捷方式可 走。建立固相萃取方法必须考虑与萃取过程相关的多种因素，归纳起来可通过下图来了解 ： 方法建立如下图片 1.jpg： 方法建立如下图片 2.jpg： 1、初步固相萃取方法的建立 建立初步的萃取方法要考虑: ·选择合适的 SPE 柱 ·选择合适的固相萃取方法 ·方法的优化 2、固相萃取柱的选择 1）柱填料的选择 首选根据目标化合物与干扰物的差异，如极性，分子量，pka 值等，选择合适的填料。 固相萃取柱的选择如下图片.jpg： 2）固 2）固相萃取柱规格的选择对于反相、正相和吸附型固相萃取柱来说，被萃取样品的质量不 超 SPE 柱填料的 5%（参考值，同一种 SPE 柱对不同的目标物选择性不同，吸附容量不同 ）；P 0cm=0cm 0cm? 0pt?离子交换型的固相萃取柱，必须考虑离子交换的容量。不 同厂家的小柱离子交换容量稍有差异。下表附 SPE 小柱的容量和洗脱参数 SPE 柱上样容量和洗脱体积的选择 规格  最大上样量  最小洗脱体积 100mg/1mL 5mg 250μL 200mg/3mL 10mg 500μL 500mg/6mL 25mg 1.2mL 1g/6mL 50mg 2.4mL 3、选择合适的固相萃取方法 固相萃取的保留机制可分为两种： ·吸附剂（填料）保留目标化合物：绝大多数化合物应用此机制，填料保留其目标组分及少 量杂质，通过淋洗步骤去除吸附在柱上的少量杂质，最后选择合适的（洗脱）溶剂把目标 组分洗脱下来。 根据吸附剂的保留机理可进一步分为： （1）反相（C18,C8,CN,Phenyl,C4,C1） · 分析物：非极性至中等极性 · 基质：水溶性 · 方法： a.活化：通常用水溶性有机溶剂如甲醇活化，然后用水平衡 b.淋洗：含 0-50%极性溶剂的缓冲溶液淋洗杂质 c.洗脱：极性或非极性溶剂洗脱目标物 （2）正相（Silica, Florisil,Diol,NH2） ·分析物：中等极性到强极性 · 基质