微生物污染的检测与控制.pdf

4.2微生物污染的检测与控制

污染：一切与培养无关的杂质（微生物、化

学物、细胞等）进入培养系统，影响培养物的

正常生理机能。

细菌

酵母菌

微生物污染的种类

霉菌

病毒

空气

器材

微生物污染的途径操作

血清

组织样本

……

细菌的污染检测与控制

当受到细菌污染时，肉眼观察可见

培养液很快颜色变黄变浑浊，产生

大量酸性物质。

细菌的污染检测与控制

显微镜下观察可见培养液中有

大量圆球状颗粒漂浮，细胞表面

和周围有大量细菌存在，细胞停

止生长、中毒、崩解死亡。

细菌污染

普通肉汤培养基

青霉素-链霉素双抗溶液

真菌的污染检测与控制

常见污染真菌有烟曲霉、黑曲霉、

毛霉菌、白念珠菌、酵母菌等。

肉眼观察可见在培养液表面会出现霉菌污染

白色或浅黄色漂浮物。

显微镜下可见细胞之间有纵横交错

穿行的丝状、管状及树枝状菌丝。

可用抗真菌剂防止真菌污染。

酵母菌污染

支原体的污染检测与控制

造成支原体高污染率的原因：

支原体大小0.1－0.8um，无细胞壁，可透过一般过滤膜

（0.22-0.45um）；

支原体污染时，没有明显的肉眼或一般光学显微镜可观

察到的特征变化；

过去缺乏简单、快速且可靠的检测方式；

细胞流通间缺乏物品管理，造成实验室间的相互污染；

研究或操作人员忽略污染问题；

已受污染的细胞；

已受污染的培养基、血清。

目前尚无有效的防范措施。

支原体的检测

支原体培养

相差显微镜观察法

DNA荧光染色法

PCR法

电镜观察

支原体的清除

用MRA支原体清除剂处理

用支原体清除剂处理细胞，每4天换一次液,连续处理

15天以确保细胞纯洁健康。

支原体清除

支原体的清除

用清洗纯化法清除支原体污染的方法

细胞营养驯化→优质细胞群的筛选→细胞清洗→反复离心洗涤

原理是：利用离心力、细胞、微生物质量和悬液的浮力差达到

清除支原体的目的。由于支原体个体小且除发酵支原体外多为

细胞外寄生,所以通过反复洗涤细胞和低速离心换液使其中潜

在的支原体数量降低至极限。

支原体的清除

药物辅助加温处理

先用药物处理后，再将污染的组织培养物放在41℃培

养18小时，可杀死支原体，但对细胞有不良影响。

使用支原体特异性血清