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植物多倍体的诱发和鉴定
一、实验目的
通过实验,进一步了解人工诱导多倍体的原理,并初步掌握用秋水仙素诱发多倍体的一般
方法及细胞学鉴定。
二、实验原理
染色体是遗传物质的主要载体。每一个物种都具有特定的形态特征。各个物种细胞内染色
体的数目都是相对恒定的,这是一个重要的生物学特征。染色体数目和结构的改变,将会导致生
物性状的改变。遗传学中把二倍体生物配子中所具有的染色体成为一个染色体组,通常用来表
n
示。而一个染色体组中包含的染色体数目成为染色体基数,用表示。同一个染色体组的各个染
x
色体的形态、结构和连锁基因群都彼此不同,但它们构成一个完整而协调的体系。
细胞中染色体数目的变异类型有两类:整倍体变异和非整倍体变异。整倍体变异指体细胞
中染色体数目按染色体组的基数(x)成倍数增加或减少的现象。具有两套染色体组的生物体成
为二倍体,体细胞中含有三个或三个以上染色体组的整倍体为多倍体。多倍体按其来源可以分为:
同源多倍体和异源多倍体,同源多倍体是指具有三个或三个以上相同染色体组的细胞或个体:异
源多倍体是体细胞中含有两个以上不同类型染色体组的多倍体。
自然界中的多倍体主要存在于植物中,动物中的多倍体很少。多倍体可以在自然条件卞产
生,也可以人工诱导形成。人工诱导多倍体通常采用物理方法和化学方法。物理方法有高温、低
温、超声波、嫁接和切断等,化学方法是使用秋水仙素、异生长素、蔡骈乙烷来诱导多倍体。在
诱导多倍体的方法中,以应用化学药剂更为有效,其中以秋水仙素效果最好,使用广泛。秋水仙
素阻碍有丝分裂中细胞纺锤体的形成,这样细胞不能分离,产生染色体加倍的核。
本实验用适当浓度的秋水仙素处理洋葱或大蒜根尖,待根尖膨人后制片观察,可诱发多倍
体。
三、实验材料
大蒜根尖
四、实验方法与步骤
(一)根尖多倍体的诱发
将人蒜去掉老根,置于盛水的培养皿上,25°C条件卞培养发根,待不定根长出1cm时取出
洗净,把水晾干后移到0.1%秋水仙素溶液中,根尖朝下,使根部浸没在药液中,于10°C培养箱中
低温培养,直到根尖膨大为止。
(二)固定
用清水洗净根尖上的秋水仙素,剪取约长的膨人根尖,以卡诺固定液固定清水
lcm2-2411,
洗净固定液,再移入70%酒精保存。
(三)解离
将根尖放入小指管中,力0lmoL-L盐酸,量以没过根尖0.5cm即可,60°C恒温水浴锅中进
行水解约6min。
(四)染色
倒掉解离液,用清水反复冲洗根尖,用解剖针切去1mm左右的根尖,置于载玻片上,
用解剖针拨碎成、块,滴加一滴改良的石炭酸品红染液进行染色
4512min°
(五)压片
盖上盖玻片,用左手的食指和中指按住盖玻片的边缘,用右手握住带胶头的玻璃棒,用胶
头端垂直均匀敲打材料部分,直到呈薄雾状。
(六)显微观察
光学显微镜下观察分析。先在低倍镜下找到细胞核染色体,再在高倍镜下观察染色体数
目。
五、实验结果
二倍体
四倍体