05 第五章 植物细胞培养及次生代谢产物生产(一).pptx

第五章 植物细胞培养及次生代谢产物的生产（一）;三个问题;植物细胞培养定义;植物细胞培养的应用;植物细胞培养与其他细胞培养的区别;植物细胞培养的方法;细胞培养常用仪器;第一节 单细胞分离及培养技术;第一种方法：用刀片刮叶片;第二种方法：叶片研碎、离心;（二）酶解法： 指用专一的水解酶(纤维素酶、果胶酶、琼脂酶等）在温和条件下分解胞间层，分离细胞。 优点：最有效的一种方法。 缺点：成本较高，酶对细胞有一定伤害。 1968年，Takebe等用该方法分离烟草叶肉细胞成功;;机械法和酶解法比较; （三）愈伤组织诱导法： 指将愈伤组织反复继代，再转移至液体培养基振荡培养。添加生长素或酶。 ;外植体;建立悬浮细胞培养系;二、单细胞培养技术;1. 步骤 　　? 制备单细胞悬浮液 　　? 调制悬浮培养液中的细胞密度 　　? 倾倒平板(植板) 　　? 密封、标记和培养 2. 优劣 平板培养法的优点在于单细胞在培养基中分布较为均匀，也便于定点观察，缺点是容易造成培养细胞的通气不良。;3.植板率 平板培养的效果一般用植板率来衡量。植板率是能长出细胞团的单细胞在接种单细胞总和中所占的比例。 植板率＝每个平板形成的细胞团数/每个平板接种的细胞总×100%;（二）看护培养与饲养层培养法 1. 看护培养：是指用一块活跃生长的愈伤组织来促进培养细胞持续分裂和增殖的培养方法。 谬尔（Muir，1953）首创此法。该方法的优点是简便易行，效果好。但不能在显微镜下追踪细胞分裂、生长过程。 ;2. 饲养层培养：是用处理过的、无活性或分裂慢的细胞来饲养所需培养的细胞，使其分裂和生长。饲养层培养具体方法有四种：① 饲养细胞与靶细胞混合。② 前者位于下层，后者相反。③ 一起培养于液体培养基中。④ 双层滤纸植板培养 ;（三）液体浅层静置培养法 指将一定密度的悬浮细胞放在培养皿中形成一浅薄层，封口静止培养。 该方法优点：易于补加新鲜培养基，便于镜检。 ;（四）细胞悬浮培养法 指将细胞接种于液体培养基中，在保持良好的分散状态下培养。 优点： ① 能大量提供比较均匀的细胞。 ② 细胞营养吸收、环境条件好，细胞增殖快。 ③ 适合大规模培养，生产有价值的活性代谢产物。 必须指出悬浮培养中既有单细胞，也有细胞团。 ;（五）微室培养 是指在人工制造的无菌小室中，将一滴悬浮细胞液培养在少量培养基上，使其分裂增殖形成细胞团的方法。 此法是De Ropp (戴洛普，1955) 首创，Torry (托瑞，1957)、Jones(琼斯，1960)改进。 优点是便于在显微镜下进行少量单细胞活体连续观察。 ;;第二节 植物细胞大规模培养与悬浮培养;一、 植物细胞大规模悬浮培养的优点 1. 可以增加培养细胞与培养液的接触面，促进营养吸收。 2. 可带走培养物产生的有害代谢产物，避免高浓度积聚对细胞的伤害。 3. 保证良好的混合状态，从而获得良好的气体传递效果 ;二、细胞悬浮培养技术;三、悬浮细胞培养的同步化方法;四、悬浮培养中细胞生长量的计算;五、细胞活力测定;六 植物细胞固定化培养;3. 植物细胞固定化技术 （1）包埋法：将细胞包埋在载体内部使细胞固定的技术。　　 常用的固定剂包括：如海藻酸盐、卡拉胶、琼脂、琼脂糖、交叉藻聚糖、明胶、聚丙酰胺等。 （2）吸附法：利用细胞能吸附到固体物质表面或其他细胞表面的能力???行培养。 常用的载体多为多孔性惰性物质材料，如聚氨酯泡沫、尼龙网、生物膜等。 ;七、生物反应器;（二）悬浮培养生物反应器;2.气升式生物反应器 ;（三）植物细胞固定化生物反应器;（四）植物细胞反应器的选择和设计;