结核分枝杆菌牛变种C68001转座子突变体库构建研究.docx

结核分枝杆菌牛变种C68001转座子突变体库构建研究

目录

结核分枝杆菌牛变种C68001转座子突变体库构建研究（1）．．．．．．．．4

研究背景与意义．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．4

1.1结核分枝杆菌牛变种概述．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．5

1.2转座子突变体库在微生物学研究中的应用．．．．．．．．．．．．．．．．．．．6

1.3研究目的与重要性．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．7

材料与方法．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．8

2.1实验材料．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．9

2.1.1结核分枝杆菌牛变种C68001菌株．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．11

2.1.2转座子载体系统．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．12

2.2转座子突变体库构建步骤．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．13

2.2.1转座子插入与筛选．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．15

2.2.2突变体库的扩增与鉴定．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．16

2.3研究方法与技术路线．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．17

结果与分析．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．18

3.1转座子插入效率分析．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．19

3.1.1转座子插入频率评估．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．20

3.1.2转座子插入位点分布．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．21

3.2突变体库的鉴定与表征．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．23

3.2.1突变体库的基因突变分析．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．24

3.2.2突变体表型特征描述．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．25

3.3突变体库的生物学功能研究．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．26

3.3.1突变体生长特性分析．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．27

3.3.2突变体致病性研究．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．28

讨论与展望．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．29

4.1转座子突变体库构建的挑战与改进．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．30

4.1.1转座子插入效率的影响因素．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．31

4.1.2突变体库的筛选与鉴定策略．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．32

4.2突变体库在结核分枝杆菌研究中的应用前景．．．．．．．．．．．．．．．．33

4.2.1结核分枝杆菌耐药机制研究．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．34

4.2.2结核病疫苗开发与治疗药物筛选．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．36

结核分枝杆菌牛变种C68001转座子突变体库构建研究（2）．．．．．．．36

一、内容简述．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．37

1.1结核分枝杆菌牛变种C68001概述．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．37

1.2转座子突变体库构建的重要性．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．38

1.3研究目的与意义．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．39

二、文献综述．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．40

2.1结核分枝杆菌牛变种研究现状．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．41

2.2转座子技术及其应用研究进展．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．43

2.3突变体库构建技术概述．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．44

三、实验材料与方法．．．．．．