分子生物学 第3章学习资料 .ppt

pBR322PvuBg1ARSTELTELBamH1BamH1四膜虫rDNABg1PvuBamH1转化酵母Pvu传代酵母TEL？！ShampayJ.Blackburn加尾实验转化酵母传代酵母TELPvu酶切连接Pvu酵母DNAPvu酵母TEL酵母TEL？！端粒的模板链在何处?端粒酶的发现为揭示端粒序列复制的模板及避免5’端短缩的机制奠定了重要的基础端粒的模板链在何处?加尾实验未能证明延伸端粒序列的模板从何而来？●端粒DNA(Telomere)TTGGGG(T2G4)序列高度重复的末端5’TTGGGGTTGGGGTTGGGGTTGGGG3’(richGchain)3’AACCCCAACCCCAACCCC5’(richCchain)●1985.CarolGreiderBlackburn,1986.Gottchling尖毛虫telomerebindingprotein–155kdtelomerebindingprotein–226kd四膜虫telomerase游扑虫telomerase+100bptelomere200－500KDaRNACAAAACCCC链+具有逆转录酶活性的末端结合蛋白(TBP）1990Yu和Blackburn在体外加尾实验的反应体系中加入这段RNA区域的反义序列GTTTTGGGGTTG证明端粒酶中CAACCCCAA序列是端粒重复序列（GGGGTT）n合成的模板端粒酶的加尾功能受到明显抑制1990Yu和Blackburn在体外加尾实验的反应体系中证明端粒酶中CAACCCCAA序列是端粒重复序列（GGGGTT）n合成的模板转化四膜虫后代的染色体端粒出现了突变序列的端粒对CAACCCCAA序列进行诱变modelTBPisReversetranscriptase-likeRNAcomplementwith3’endofDNAastemplateforcDNAElongatedT2G43’-endasprimerfor5’-endDNAsynthesisG链–T2G4-----TTGGGGTTGGGC链--A2C4----telomerase3’aaaAACCCCAACuuac---5’TTGG链–T2G4-----GGTTGGGC链--A2C4----TTGtelomerase3’aaaAACCCCAACuuac---5’GGGTTGG链–T2G4-----GGTTGGGC链--A2C4----TTGGGGTTG-------------telomerase3’CCAACCCCAACCCC---5’telomerase3’CCAACCCCAACCCC---5’WhenG-richstrandislongerenoughtelomerase3’aaaAACCCCAACuuac---5’GGhoogsteenbondTetraplexhelixG链–T2G4-----TTGGGGTTGGGGTTGGGGTTGGGGTTGGGGC链--A2C4-----G链–T2G4-----TTGGGGttggggttgC链--A2C4-----AACCCCAAggggttgggPrimaseAACCCCAACCCCAACCCCAACCCCAACCCDNApolorTelomeraseactivityisrepressedinsomaticcellsofmulticelluarorganismsresulti