酶联免疫吸附试验的影响因素..ppt
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酶联免疫吸附试验的影响因素.ppt
“边缘效应”的排除1.“边缘效应”，即外周孔显色较中心孔深;2.有研究证实在温育中的热力学梯度可能是根本原因。3.聚苯乙烯本身为不良热导体，板从室（通常在25℃左右）置于37℃温箱，板升温时，在外周孔与中心孔之间可能存在一热力学梯度。第29页，共48页，星期日，2025年，2月5日总而言之，在临床ELISA测定中，要保证好的测定效果，应尽量采用水浴。温育中让微孔板浮于水面上（浸入1/3），或将浸透水的沙布放入一大饭盒中形成湿盒，然后放于温箱中，这样可使微孔板板孔底部直接与37℃水或湿布接触，而且水浴箱或湿盒内温度较高，可使反应溶液的温度迅速与温室平衡。第30页，共48页，星期日，2025年，2
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酶联免疫吸附试验的影响因素.ppt
酶联免疫吸附试验的
影响因素
检验科;实验过程中的影响因素;一、标本
;血清标本;采血试管;标本采集后，应先将标本37°放置
30-60分钟后采用3000r
/min离心15-20分钟，取
上清液加样。;标本的离心;标本的保存;标本的保存
4.混浊或有沉淀的血清标本应先离心或
过滤，澄清后再检测。
5.作屡次检测，宜少量分装冰存;
6.血清标本宜在新鲜时检测尽量防止细
菌污染。; ;溶血标本;脂血标本;二、试剂
1.试剂盒保存于2-8℃
2.使用前应先将检测试剂
盒放置室温平衡15-30
分钟，保证酶等液体的初始反响温度及
活性剂的溶解。
3.观察外包装和内组份有无漏液。;三、加样
;加样过程
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酶联免疫吸附试验.pdf
〕
一、实验目的
了解ELISA的根本原理,掌握间接ELISA方法的原理与操作步骤.
二、实验原理
将抗原或抗体固化于某种载体的外表,并保持其免疫活性,参加待检血清〔抗体〕,
然后参加与其相对应的既有酶活性又有免疫活性的酶标抗体或抗原,它们之间反响后,
通过洗涤去掉未结合的标记物.参加酶反响的底物后,底物被酶催化变为有色产物,酶的降解底物和呈现
的色泽在一定条件下是呈正比的,故可根据颜色反响的深浅进行定性或
定量分析,因此可用分光光度计进行测定,计算出参加反响的抗原或抗体的含量,从
而到达测定抗原或抗体的目的.
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酶联免疫吸附试验.doc
实验二 酶联免疫吸附试验
1.实验目的
①了解ELISA反应原理、类型及特点
②掌握直接ELISA操作步骤
③通过实验认识抗体的双重性
2.实验原理
① 抗原或抗体能物理性地吸附于固相载体表面，可能是蛋白和聚苯乙烯表面间的疏水性部分相互吸附，吸附后的抗原或抗体仍保持其免疫学活性。
②酶可与抗体通过共价键连接而形成酶标记抗体，这种结合作用并不影响抗体的免疫学活性和酶的催化活性。
③酶标抗体中的酶可催化无色底物形成有色产物，酶标抗体与相应抗原或抗体结合后，可根据有无颜色反应来判定是否有免疫反应发生，而且颜色反应的深浅是与标本中相应抗原或抗体的量成正比，因此，可以按底物显色的程度来显示试验结果。
3
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酶联免疫吸附试验.ppt
固相抗原标本（含抗体）酶标二抗底物EEE3.原理第31页，共73页，星期日，2025年，2月5日4.加酶作用的底物显色2.加待检抗体洗涤1.已知抗原包被载体（+）YYY3.加酶标二抗洗涤YYYYEYEYEYYYYEYEYE4.加酶作用的底物不显色2.加待检物（无抗体）洗涤1.已知抗原包被载体（-）3.加酶标二抗洗涤YEYEYE洗涤洗涤4.操作步骤第32页，共73页，星期日，2025年，2月5日（五）双抗原夹心法检测抗体用同一种抗原分别作为酶标抗原和固相抗原以检测抗体的方法用于抗体的检测1．原理2．应用第33页，共73页，星期日，2025年，2月5日E固相抗体标本（含抗体）酶标抗原底物EE3.原
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ELISA(酶联免疫吸附试验).ppt
酶联免疫吸附试验 Enzyme-Linked? Immunosorbent? Assay ELISA 中心实验室 王丽萍 2014.8.8 ELISA是以免疫学反应为基础，将抗原、抗体的特异性反应与酶对底物的高效催化作用相结合起来的一种敏感性很高的试验技术。 在实际应用中，具体的方法步骤可有多种:用于检测抗原的双抗体夹心法、用于检测抗体的间接法以及用于检测小分子抗原或半抗原的抗原竞争法等等。比较常用的是双抗体夹心法及间接法。 目录 双抗体夹心法 竞争法 间接法 捕获法 ABS-ELISA 双抗体夹心法 双抗体夹心法是检测抗原最常用的方法，在临床检验中，此法适用于检验各种蛋白质等大分子抗原
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1酶联免疫吸附试验ELISA.ppt
实验五 1.酶联免疫吸附试验（ELISA) 2.补体结合反应 1.酶联免疫吸附试验（ELISA) 免疫标记技术 定义： 将抗原-抗体反应与标记技术相结合，用放射性同位素、酶或荧光素标记的已知抗体或抗原，通过检测标记物，间接测定未知的抗原或抗体。 分类： 放射免疫测定法：131I，32P 免疫荧光技术：FITC，PE 免疫酶测定法：HRP，AP 免疫酶测定法 (Enzyme ImmunoAssay,EIA) 用酶标记的抗原或抗体进行的抗原抗体反应。 辣根过氧化物酶(HRP)，碱性磷酸酶(AP) 特点： 高度特异性：保持抗原抗体反应的特异性 高灵敏度：酶催化底物显色的高效性，pg水平微
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ELISA酶联免疫吸附试验.pptx
ELISA酶联免疫吸附试验;酶联免疫吸附实验;一、目得要求;二、教学内容;三、实验原理;;三、实验原理;三、实验原理;三、实验原理;三、实验原理;;;大家有疑问的，可以询问和交流;;;;;四、实验步骤;四、实验步骤;五、注意事项;六、ELISA得应用;六、ELISA得应用;六、ELISA得应用;六、ELISA得应用;六、ELISA得应用;七、ELISA存在得问题;七、ELISA存在得问题;七、ELISA存在得问题;七、ELISA存在得问题;八:ELISA得影响因素;;;;;;;;;;
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ELISA酶联免疫吸附试验报告.doc
大学实验报告
酶联免疫吸附试验
学院：
专业：
姓名：
学号：
一．实验原理
酶联免疫吸附试验（ELISA）是一种用酶标记抗原或抗体的方法，此法是将抗原、抗体免疫反应的特异性和酶的高效催化作用原理有机地结合起来的技术，可敏感地检测体液中微量的特异性抗原或抗体。基本原理如下：①先使用抗原或抗体结合到某种固相载体表面，并保持其免疫活性；②使抗原或抗体与某种酶联结成酶标抗原或酶标抗体，这种酶标抗原或酶标抗体即保留了其免疫活性，又保留了酶活性；③试验时，把受检标本（抗体或抗原）和酶标抗原或酶标抗体按不同的步骤与固相载体表面的抗原或抗体起反应，用洗涤法去除固相载体上的游离物质，最后结合在固相载体上的
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酶联免疫吸附试验检测伤寒O抗体.ppt
CompanyLogoCompanyLogoCompanyLogoCompanyLogoCompanyLogoCompanyLogoCompanyLogoCompanyLogoCompanyLogo关于酶联免疫吸附试验检测伤寒O抗体第1页，共21页，星期日，2025年，2月5日CompanyLogo摘要目的：检测伤寒O抗体一般采用肥达实验（直接凝集实验），在临床诊断中有重要的意义。能否建立一个用酶联免疫吸附法检测血清中抗伤寒“O”抗体的实验体系，提高临床诊断效果是本实验要解决的关键问题。第2页，共21页，星期日，2025年，2月5日原理：以伤寒O抗原免疫动物，制备出抗伤寒O抗体，将后者纯化，与
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GB/T 17999.5-1999SPF鸡 酶联免疫吸附试验.pdf
GB/T17999.5-1999
前 言
酶联免疫吸附试验(ELISA)是国外监测SPF鸡淋巴白血病病毒感染的通用方法。我国建立的淋巴
白血病ELISA方法敏感性高、特异性强、重复性好，已广泛用于商品种鸡场淋巴白血病的净化和SPF
鸡场淋巴白血病病毒感染的监测，本标准在此基础上，规定了SPF鸡酶联免疫吸附试验。
SPFA鸟微生物学质量控制国家系列标准，包括SPF鸡微生物学监测总则和9种SPF鸡微生物学检
测方法。本标准为(((SPF鸡 酶联免疫吸附试验》。
SPF鸡微生物
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酶联免疫吸附试验——ELISA要点.ppt
酶联免疫吸附实验 (Enzyme-Linked ImmunoSorbent Assay,ELISA) ——检测乙肝表面抗原 实验目的要求 掌握ELISA的基本原理 掌握ELISA双抗体夹心法检测HBsAg的原理、操作方法及结果判断 熟悉表面抗原检测的临床意义 （一）ELISA的原理 ELISA的基本原理 三种必要的试剂： ①固相的抗原或抗体，即“免疫吸附剂” （immunosorbent） ②酶标记的抗原或抗体，称为结合物（conjugate） ③酶作用的底物 在测定时，受检标本（测定其中的抗体或抗原）与固相载体表面的抗原或抗体起反应。 用洗涤的方法使固相载体上形成的
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实验三酶联免疫吸附试验(ELISA.pptx
实验五
1.酶联免疫吸附实验（ELISA)
2.补体结合反映;1.酶联免疫吸附实验（ELISA);免疫标记技术;免疫酶测定法
(EnzymeImmunoAssay,EIA);酶联免疫吸附实验
(Enzyme-LinkedImmunoSorbentAssay,ELISA);酶联免疫吸附实验
(Enzyme-LinkedImmunoSorbentAssay,ELISA);实验内容：
间接法测定溶血素——定性检测;实验材料;实验办法;取出包被好抗原旳酶标板（4孔/组），甩干孔内液体;预期成果;注意事项;2.补体结合反映
（ComplementfixationTest,CFT）;概念：;补反中涉及两个
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酶联免疫吸附试验——ELISA创新.ppt
酶联免疫吸附实验 (Enzyme-Linked ImmunoSorbent Assay,ELISA) ——检测乙肝表面抗原 实验目的要求 掌握ELISA的基本原理 掌握ELISA双抗体夹心法检测HBsAg的原理、操作方法及结果判断 熟悉表面抗原检测的临床意义 （一）ELISA的原理 ELISA的基本原理 三种必要的试剂： ①固相的抗原或抗体，即“免疫吸附剂” （immunosorbent） ②酶标记的抗原或抗体，称为结合物（conjugate） ③酶作用的底物 在测定时，受检标本（测定其中的抗体或抗原）与固相载体表面的抗原或抗体起反应。 用洗涤的方法使固相载体上形成的
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酶联免疫吸附试验和其应用.PDF
酶联免疫吸附试验及其应用
作者：鲍行豪
一、 前 言
近二十几年来，免疫学分析方法发展很快，特别是在使用标记了的抗原和抗体的分析技术以
后，使原来许多经典的分析方法在敏感性和特异性方面都不能相比。继 50 年代的免疫荧光（IFA）
和 60 年代的放射免疫(RIA)分析技术之后，在 70 年代初期又建立了用酶来标记抗原或抗体的分
析技术。由于酶的高效生物催化作用，一个酶分子在数分钟内可以催化几十几百个底物分子发生
反应，产生了放大作用，使