植物生物学实验-二-2根系活力的测定-a-萘胺氧化法.ppt

实验二、根系活力的测定

——a-萘胺氧化法植物生物学实验(二)植物生理学基础与综合实验南京师范大学生命科学学院了解根系活力的生理意义；掌握分光光度计的使用过程和注意事项掌握a-萘胺氧化法,测定根系活力的原理与方法。一、实验目的贮藏06合成05固着04输导03吸收：水分、无机盐、CO2。02植物根系的生理功能:01二、实验原理根系吸收无机盐的过程：部位：根尖，根毛区最活跃。步骤1.呼吸释放CO2；2.形成H2CO3；3.H+与HCO3-吸附在根表面。4.溶液中阴阳离子分别与HCO3-、H+交换。5.吸收，进入根内部。6.运输。STEP1STEP2STEP3STEP4根系活力即根的生长情况和代谢水平。它直接影响植物地上部的生长和营养状况以及产量。植物根系中的过氧化物酶能氧化α-萘胺，生成红色的α-羟基-1-萘胺，并沉淀于根表面，将根系染成红色。一般来说根呼吸强度越大，即该酶的活力越强，对α-萘胺的氧化力也越强，染色也越深。可以根据根系表面着色深浅，定性观察并判断根系活力大小，也可通过测定溶液中未被氧化的α-萘胺的量，以定量测定根系活力。（二）根系活力的意义与测定方法定性观察根系表面红色越深，说明根系活力越强。定量测定剩余的α-萘胺在酸性环境中可与对氨基苯磺酸（sulfanil-amide）和亚硝酸盐作用生成稳定的红色偶氮染料。定量测定对-苯磺酸-偶氮-α-萘胺生成的红色偶氮化合物在pH7.0时在510nm处有最大吸收峰，可用分光光度法测定光吸收值，从而利用此反应来间接测定溶液中α-萘胺的量。OD510越大→α-萘胺剩余越多→根系活力越弱反应液的酸度大则增加重氮化作用的速度，但降低偶联作用的速度，颜色比较稳定。增加温度可以增加反应速度，但降低重氮盐的稳定度，所以反应需要在相同条件下进行。注意：三、实验材料与仪器设备（一）实验材料水稻(OryzasativaL.)等水生植物的须根系。（二）仪器与用品分光光度计、天平、恒温培养箱、三角烧瓶、量筒、移液管、剪刀、玻棒。（三）试剂α-萘胺溶液：先用少量的95%酒精溶解，然后加水定容。分别配制50μg/mL、25μg/mL溶液。0.1mol/L磷酸缓冲液，pH7.0。1%对氨基苯磺酸溶液：溶解于30%的醋酸溶液中。0.01%亚硝酸钠溶液。四、实验步骤定性观察：处理：挖取处于不同生长状态的须根系植株（如水稻、豌豆苗根系等）数株，洗净根部后再用滤纸吸去根上附着的水分。21将植株根系浸入盛有25μg/mLα-萘胺溶液并用黑纸包裹的容器中，静置24-36小时后观察根系着色情况。比较不同植株根系活力大小，并与植物生长势比较，分析植物生长势与根系活力之间的关系。2.观察取50μg/mL的α-萘胺溶液和0.1mol/LpH7.0的磷酸缓冲液各25mL，置于三角瓶中，混匀。称取根系2g浸没于三角瓶中的溶液中。同样地，取50μg/mL的α-萘胺溶液和0.1mol/LpH7.0的磷酸缓冲液各25mL，置于另一三角瓶中，混匀，不放根系作为对照。步骤1、实验处理（二）定量测定步骤2、实验初始值测定5min后，分别从两瓶中各取2mL溶液，按照步骤4作第一次测定。记录OD（实验组）与OD0（对照组）。将两三角瓶置于25℃恒温箱中避光保温60min后，各取2mL，按照步骤4作第二次测定。记录OD’（实验组）与OD’0（对照组）。壹贰步骤3、实验终了值测定步骤4、a-萘胺含量测定取2mL培养液加10mL水混匀，再顺次加入1mL对氨基苯磺酸溶液与1mL亚硝酸钠溶液，混匀，观察溶液颜色变化，再定容至25mL。室温25min后，于510nm处测定吸光度（OD）值。