分子生物学实验基本操作和注意事项.ppt

分子生物学实验 王 亮 研究方向：纤毛组装调控机制，抗重金属衣藻藻株筛选与鉴定 办公室：1#110 QQ/微信电话分子生物学实验注意事项 关于试剂的防污染： 凡是可以进行灭菌的试剂与用具都必须要经过高压蒸汽灭菌后进行使用，防止杂菌或酶类对样品、试剂的污染。 Eppendorf管、枪头等的装盒或装瓶过程中都应采用镊子，或戴上一次性手套进行操作，不能直接用手去拿。 打开EP管，不要用手接触管盖及管口内侧。 不要对着暴露的试剂说话、咳嗽或打喷嚏。 保持实验环境的干净卫生。 关于酶的保存和使用： Taq DNA聚合酶、连接酶、限制性内切酶等工具酶保存于50%的甘油中，-20°C 可以长期保存。 在需要用酶（一般最后一个加）的时候再将酶从冰箱中取出，放在冰盒里，用完后立即放回冰箱。使用过程中，尽量将酶保持在零度以下，取酶时不能用手指接触储存酶的部分。 加入后再用枪头抽吸几次。 关于EB操作： EB强诱变性，有挥发性。 务必带手套进入EB操作间，出操作间时务必取下手套放在指定纸篓；不得将身体靠在实验台或仪器上。 必须带进EB室的器具，注意防EB污染。 不得将EB室内原有的物件带出操作间，不得随意丢弃EB污染的垃圾。 目前使用EB的替代物：GelRed，GoldView，SYBR Green 其他： 实验中加入任何试剂后应注意样品的混匀，混匀后的样品应低速离心后再进行下步的实验。 实验过程中应做好每个样品的标记工作，如样品的名称、保存的时间．且一般在EP管上用记号笔作标记时，同时做好实验记录。 涉及微生物培养的操作，应在超净工作台上进行。 微量移液器的使用： 操作步骤： 在量程范围内，调节至所需要的容量刻度。 将微量移液器按钮轻轻压至第一停点。 垂直握持微量移液器，使吸嘴浸入液样面下，不要将枪头直接插到液体底部。 缓慢、平稳地松开控制按钮，吸上样液。否则液体进入枪头太快，导致液体倒吸入移液器内部，或吸入体积减少。 等一秒钟后将枪头提离液面； 排液时，平稳地把按钮压到第一停点，再把按钮压至第二停点以排出剩余液体。提起微量移液器，使枪头在容器壁擦过; 然后按枪头弹射器除去枪头。 将移液器恢复至量程范围内的最大刻度。 注意事项： 未装枪头的微量移液器绝对不可用来吸取任何液体。 一定要在允许范围内设定体积，千万不要将容量的调节超出其适用的刻度范围，否则会造成损坏。 不要横放或倒放带有残余液体枪头的移液器。 不要用大量程的移液器移取小体积样品。 实验守则 务必穿实验服,带实验工具。 不得将食物带入实验室。 严格按操作规程进行实验，及时记录实验现象及结果。课后认真做好实验报告。 正确使用仪器，发现故障及时报告。 公用试剂用完后，应立即盖好放回原处。 实验小组有固定实验台，不得随意改变位置；实验结束后，各小组将小组用具洗刷干净，集中摆放整齐，并清洁本组实验台。 EB操作间：务必带手套进入，出操作间时务必取下手套放在指定纸篓；不得将身体靠在实验台或仪器上。 每次实验各小组轮流值日，值日生务必在老师检查合格后再签字离开。