第六章环境三致物的生物检测.pptx

环境三致物的生物检测环境三致物：指能致畸、致癌、致突变的物质DNA基因染色体的作用检测DNA损伤，DNA损伤修复等检测三致物对基因突变，包括正向突变和回复突变染色体畸变试验；微核试验；SCE试验特点：时间短、成本低、结果可靠

项目九蚕豆根尖微核监测技术一、蚕豆根尖微核技术的原理让我们复习一下细胞有丝分裂的过程吧

有丝分裂各时期

植物细胞的有丝分裂

有丝分列各期图像

项目九蚕豆根尖微核监测技术一、蚕豆根尖微核技术的原理蚕豆根尖细胞在进行有丝分裂过程中，染色体经常发生断裂，但一般情况下，断裂可以自行愈合，如果受到有害因子的攻击，染色体就不能愈合，甚至增加断裂，形成染色体片段，这些染色体片段由于缺乏着丝点而不能到达细胞的两极，而留在细胞质中，一旦新细胞核形成，这些片段就形成大小不同的小核，即微核。因此，我们可以根据微核率的高低说明诱变物的强弱。

项目九蚕豆根尖微核监测技术二、受试生物材料松滋青皮豆，或其他蚕豆品种1.蚕豆浸种催芽25℃，浸泡26～30h浸种催芽：用纱布松松包裹吸涨的种子置解剖盘内，保持湿度，在25℃的温箱中催芽12～30h。待种子初生根露出2～3mm，再选取发芽良好的种子，放入铺满薄层湿脱脂棉的解剖盘内，仍在25℃下催芽36～48h，当大部分种子的初生根长至2～3cm时，即可用于处理三、试验步骤

项目九蚕豆根尖微核监测技术2.处理根尖每一处理选取6～8粒初生根生长良好，根长一致的种子，放入盛有被测液的培养皿中，让被测液浸泡住根尖即可，用自来水（或蒸馏水）作对照处理，方法相同。处理时间为4～6h。3.根尖细胞恢复培养将处理后的种子，用自来水（或蒸馏水）浸洗3次，每次2～3min，然后把洗净的种子再放入湿脱脂棉盘中，按前述培养条件恢复培养22～24h

项目九蚕豆根尖微核监测技术4.根尖细胞的固定将恢复后的种子，从根尖顶端切下lcm长幼根放入青霉素空瓶中，加卡诺氏液固定24h5.孚尔根（Feulgen）染色(1)固定好的幼根，在青霉素瓶中用蒸馏水浸洗2次，每次5min(2)吸净残水，再加5mol/LHCI将幼根泡住，连瓶放入28℃水浴锅中水解幼根25min左右，至幼根被软化即可(3)用蒸馏水浸洗幼根2次，每次5min

项目九蚕豆根尖微核监测技术(4)在暗室或遮光的条件下加席夫（Schiff）试剂，染色1～4h(5)除去染液，用SO2洗涤液浸洗幼根2次，每次5min(6)用蒸馏水浸洗1次，5min(7)将幼根放入新换的蒸馏水中，置4℃的冰箱内保存，可供随时制片之用。6.制片45%醋酸压片法

项目九蚕豆根尖微核监测技术7.镜检及微核识别标准◆大小是主核大小的1/3以下，并与主核分离；◆形状为圆形、椭圆形或不规则形；◆着色与主核相当或稍浅每一处理观察3个根尖，每个根尖随机计数1000个细胞中的微核数

项目九蚕豆根尖微核监测技术五、实验数据的统计处理和污染程度的划分（一）数据处理1.按以下公式计算各测试样品（包括对照组）的微核千分率（MCN‰）MCN‰=某测试点（或对照组）观察到的MCN数某测试点（或对照组）观察到的细胞数×100％2.如果被监测的样品不多，可直接用各样品MCN率平均值与对照比较（t检验），从差异的显著性判断水质污染与否

项目九蚕豆根尖微核监测技术3.如果被检测的样品较多，可先用方差分析（F检验）看各样品的MCN‰平均值与对照的差异显著性。（二）结果评价1.利用“MCN‰”进行评价10‰ 无污染10‰～18‰ 轻污染18‰～30‰ 中污染30‰ 重污染

项目九蚕豆根尖微核监测技术2.利用“污染指数”进行评价PI值越高，说明污染越重。0～1.5基本没有污染1.5～2轻污染2～3.5中污染3.5重污染（三）结果报告

1、Geniusonlymeanshard-workingalloneslife.(Mendeleyer,RussianChemist)?天才只意味着终身不懈的努力。20.8.58.5.202011:0311:03:10Aug-2011:032、Ourdestinyoffersnotonlythecupofdespair,butthechaliceofopportunity.(RichardNixon,AmericanPresident)命运给予我们的不是失望之酒，而是机会之杯。二〇二〇年八月五日2020年8月5日星期三3、Patienceisbitter,butitsfruitissweet.(JeanJacquesRou