单克隆抗体技术 .pdf
6.2单克隆抗体技术
细胞融合技术使人们可以按照预先设计使不同的细胞融
合，创造新的杂合细胞。其中最为经典的应用是单克隆
抗体制备。
抗体的基本知识
抗原：进入动物体内对机体的免疫系统产生刺激作用的外
源物质。包括：蛋白质、多糖、核酸、病毒、细菌、各种
细胞等。
外源性
特点结构性
特异性
抗体的基本知识
抗体：动物免疫系统分泌的中和或消除抗原物质的影响的糖
蛋白，存在于血清中，本质是免疫球蛋白。
抗体的基本知识
人体B淋巴细胞
淋巴
细胞T淋巴细胞
B淋巴细胞和T淋巴细胞
抗体的基本知识
上述两种消灭病原体的名称叫免疫。
免疫系统
固有免疫适应免疫
免疫分子免疫细胞体液免疫细胞免疫
补体吞噬细胞B细胞（抗体）T细胞
抗体的基本知识
单克隆抗体：是由B淋巴细胞转化而来的浆细胞分泌的，每
个B细胞株只能产生一种它专有的、针对一种特异性抗原决
定簇的抗体。这种从一株单一细胞系产生的抗体就叫单克
隆抗体,简称单抗。
抗体的基本知识
多克隆抗体：是一种抗原通常具有多个不同的抗原决定簇，
因此能刺激多个B淋巴细胞产生相应的单克隆抗体，因此血
清中的抗体是针对不同抗原决定簇的单克隆抗体混合物。
抗原决定簇
抗原决定簇
抗体的基本知识
抗原决定簇：又称表位，是指抗原表面决定抗原特异性的
某些特定化学结构（包括化学基团和分子构象），抗原以
此与相应淋巴细胞表面的抗原受体结合，进而引起免疫应
答和免疫反应。抗原决定簇
单克隆抗体的制备原理
骨髓瘤细胞易在培养基中生长
用细胞融合法将骨髓瘤细胞永久生长的特性导入可生产
有用抗体的B淋巴细胞中，则得到可在培养基中永久生
长的B细胞株，此即杂交瘤细胞株。
杂交瘤细胞既具有B淋巴细胞产生特异性抗体的能力，又
具有肿瘤细胞在体外无限增殖的特点，可不断在细胞培
养上清液中产生单抗。
单克隆抗体的交叉反应
分子构造相似的不同抗原，由于它们含有共同或相似的
抗原决定簇，所产生的单克隆抗体对这两种相似的抗原
都会产生反应，因此在检测此类抗原时，其专一性不很
理想，可能会出现假阳性，也称为交叉反应性。
对乳酸脱氢酶的单克隆抗体很可能会和异柠檬酸脱氢酶
起交叉反应。
单克隆抗体的制备
一般制备步骤：免疫动物、脾细胞分离、骨髓瘤细胞的准
备、细胞融合、融合细胞的筛选与克隆、单克隆抗体的大
量制备等步骤。
免疫动物
目的：B淋巴细胞在抗原刺激下分化增殖，使之有利于融合
成杂交瘤细胞，尤其是能分泌特异性抗体的杂交瘤融合细
胞频率增加。
动物选择应与骨髓瘤细胞来源相同的同一品系动物。
BALB/c小鼠
免疫动物
不加
可溶性抗原：蛋白质、核酸、多糖、多肽等佐剂
抗原
颗粒性抗原：细胞、病毒、细菌等加佐剂
初次免疫时一般用完全弗氏佐剂将抗原制成乳剂
加强免疫时一般用不完全弗氏佐剂制成乳剂进行免疫
免疫动物
腹腔注射：最常用，适合于几乎所有抗原
皮下淋巴样器官注射：多适用于可溶性抗原
免疫
途径静脉注射：不宜用于大颗粒性抗原，不宜作为
初次