利用根霉菌生产血纤维蛋白溶解酶及γ.doc

利用根黴菌生產血纖維蛋白溶解酶及γ-胺基丁酸之研究 Study on the fibrinolytic protease and γ-aminobutyric acid producing from Rhizopus sp. 研究生：張瓊尹 Chang, Chiung-Yin 指導教授：謝寶全 Hsieh, Pao-Chuan 【摘要】 近年來國人死於心血管疾病的人數有逐年攀升的趨勢，隨著年齡增加死亡人數也隨之升高。目前在治療心血管疾病的臨床用藥上，大多都有副作用。故近年來，許多調解血壓的醱酵食品漸漸展露頭角，例如天貝、納豆和味噌Rhizopus oligosporus發酵後之產物。根據文獻指出，天貝含有血纖維溶解酶 fibrinolytic enzyme ; FE 及γ-胺基丁酸 γ-aminobutyric acid ; GABA ，具有防止動脈粥狀硬化、血栓及降血壓等生理功效。由市售天貝產品篩出具有產生降血壓物質及高活性之FE及GABA之菌株-Rhizopus sp.，並探討其在液態及固態生產的最適培養條件，再以Salmonella typhimurium TA98、TA100進行毒性試驗；以Hep-G2及BNL CL.2進行細胞毒性試驗；體內試驗以雄性八週齡正常血壓及自發性高血壓鼠 Spontaneous hypertension rats；SHR 作為實驗對象，正常血壓鼠 Wistar Kyoto；WKY 作為對照組，評估其降血壓之功效及其毒性評估。結果顯示，經探討後，利用液態培養法探討菌株 Rhizopus sp. M6-8生產以振盪速度 rpm，接種量 % ，培養基組成分為8 % maltose，1 % ， % soytone peptone及0.1 % NaCl，起始培養基pH7.0 ± 0.2，3℃振盪培養2小時後，培養液中U/mL之間；GABA含量則為160.1～168.1 mg/mL之間。生產0% 黃豆及0% 薏仁為固態醱酵基質，在10% 接種量，在30℃培養溫度下，另添加3% sorbitol、3% peptone、0.1% NaCl，經培養所生產之，72小時後，產物所生產之U/g，熱風及冷風進行乾燥程序，經冷風乾燥處理48小時，樣品水分含量降至%，且樣品活性較乾燥%，顯示以冷風乾燥處理為較佳樣品乾燥方式醱酵物抗氧化能力方面，經乾燥後具有良好之抗氧化能力，其能力可隨樣品濃度增加而提升，在醱酵物濃度為10 mg/mL時，其清除DPPH能力、螯合亞鐵離子能力及分別%、%與% 。醱酵物進行安姆試驗 Ames test 中發現，對於S. typhimurium TA 97及TA 100菌株均不具毒性及致突變性。在抗致突變性方面，結果顯示醱酵物具有良好之抗致突變性。醱酵物於 mg/plate濃度時即可抑制由NQNO 所引起之致突變性，其抑制能力為%，並隨醱酵物濃度之提高而上升。醱酵物以不同濃度與人類肝癌細胞Hep G2與初生鼠正常肝細胞BNL CL.2進行細胞存活試驗中發現，醱酵物質並不影響 BNL CL.2細胞生長，且其細胞存活率可隨醱酵物濃度增加而上升，在 mg/mL濃度下，經培養小時後，BNL CL.2 細胞存活率為%。在Hep G2 細胞中，經培養48小時後，mg/mL濃度並不影響Hep G2存活率，但濃度mg/mL則使細胞存活率。醱酵物經乾燥後，分別以不同溫度條件（-20、4、0、30℃）進行儲存試驗，-20℃及4℃在於儲存期間其活性與對照組相比較並無明顯變化，於儲存第120天後，其活性與對照組比較仍可保持0 % 以上。致突變性Recently, the number of death caused by hypertensive disease has been increased. The death number increases with the increase of age. In the modern medicines, there are some side effects for the treatment of hypertension. In recent years, there are many fermented foods with antihypertensive components attempting to develop new function foods for hypertension, such as tempeh, natto, miso, and so on. Tempeh is made from soybean fermented by Rhizopus oligosporus. The present studies reporte