酶促反应动力学实验.ppt

反竞争性抑制曲线图特点:V下降，发生抑制Vmax减小Km减小（三）本次实验方案碱性磷酸苯二钠本次实验以为底物, 为催化剂,作为抑制剂，分别观察无抑制剂和有抑制剂时底物浓度与酶促反应速度之间的关系。磷酸酶AKP磷酸氢二钠生化教研室朱欣婷C6H5NH3C-NH3C-CC-NH2C=OH3C-NOH+C6H5NH3C-NH3C-CC-N=C=OH3C-NOK3Fe(CN)6OH-4-氨基安替比林醌衍生物O-P=OONaONa磷酸苯二钠+H2OAKPOHHO-P=OONaONa+酚醌衍生物为红色,根据红色深浅测出光密度值,计算不同底物浓度时酶的反应速度（以产物的生成量表示）,以1/V-1/[S]双倒数作图，获得Km值。添加试剂（两人一组，1人按照p45，另1人按照p50的要求量取溶液）137摄氏度水浴准确保温15分钟2立即加入碱性溶液1.10ml终止反应33%4-氨基安替比林1.00ml45%铁氰化钾2.00ml5每步充分混匀,室温放置10分钟6以0管调零,波长510nm比色7实验五酶促反应动力学实验(Experimentsonenzymekinectics)

遵义医学院生物化学教研室朱欣婷观察底物浓度对酶促反应速度的影响。观察抑制剂对酶促反应速度的影响。掌握用双倒数作图法测定碱性磷酸酶的km值。酶促反应动力学:影响酶促反应速度(V)的因素:研究酶促反应的速度以及影响此速度的各种因素的科学。1.底物浓度[S]2.酶的浓度3.温度4.pH5.酶的激活剂6.酶的抑制剂0405底物浓度对酶促反应速度的影响01Vmax03当底物浓度较低时,V随[S]的增大而急剧上升,两者成正比关系.随着底物浓度继续增加,反应速度增加,而幅度不断下降,若继续加大[S]反应速度就不再增加,达到一个极限值Vmax.02[S]与V的关系:米-曼氏方程Vmax--最大反应速度Km--米氏常数当V＝1/2Vmax时，Km＝［S］Km值的物理意义:即Km值是当酶反应速率达到最大反应速率一半时的底物浓度。Km和Vmax值的测定(1)测定不同底物浓度的反应初速率，以V-[S]作 图可以得到Vmax，再从1/2Vmax，可求得相应的 [S]，即Km值。Vmax?Vmax[S]vKm双倒数作图法：将米氏方程式两侧取双倒 数，以1/V-1/[S]作图，得出一直线.Km和Vmax值的测定抑制剂对酶促反应速度的影响1酶的抑制剂：2抑制作用类型3可逆性4不可逆性5竞争性抑制6非竞争性抑制7反竞争性抑制8凡能降低酶的活性，甚至使酶完全丧失活性，但不使底物变性的物质。91.竞争性抑制曲线图竞争性抑制剂与酶的底物结构相似,与底物竞争酶的活性中心,从而阻碍酶与底物的结合.特点:（1）V下降，发生抑制（2）Vmax不变（3）Km增大，亲和力下降非竞争性抑制曲线图01抑制剂与酶活性中心以外的必需基团结合,不影响酶与底物的结合,底物与抑制剂之间没有竞争关系.02特点:03V下降，发生抑制Vmax减小Km不变04