细胞生物学实验技术(一).ppt

超净工作台的清洁维护：保持工作台上无死角，让空气得到充分过滤，即试验完毕后，将所有的用品收藏起来，工作台上只留有酒精灯及橡皮头。工作前和工作完毕都要用酒精擦桌面，如果桌面滴有培养液等物，实验结束后应先用水擦，然后用酒精再擦。还需定期检测工作台滤器过滤的效率。整个接种操作应在近火焰处进行，且动作要迅速

正确错误正确错误正确错误正确错误2，CO2培养箱CO2培养箱设定的条件为37℃，100%湿度，5％CO2。使用CO2培养箱培养细胞时应注意的问题①用螺旋口瓶培养细胞时，需将瓶盖微松，以保证通气。②保持培养箱内空气干净。定期消毒（90℃，14h)。③箱内灭菌蒸馏水3000毫升蒸馏水，以保持箱内湿度，避免培养液蒸发。湿度以第二天第一次开门，能看到玻璃门上的水珠3．消毒设备：A.高压消毒锅（Autoclave）：110oC，15lb，20分钟，适合于橡皮、纸、布、塑料制品和液体（9lb，10分钟）等。消毒后必须在烤箱中低温烤干。01C.酒精消毒：解剖器械、塑料器皿、动物皮毛等，酒精浓度为75－95％。03B.干热消毒箱：150-200oC，2-3小时。适合于玻璃器皿、金属器械等。02高压消毒锅D.滤膜过滤：正压过滤:蠕动泵通入培液；通入气体。010203负压过滤：用水泵或油泵抽滤。滤膜孔径为0.22μm，为延长滤膜寿命可同时添加0.45μm和1.2μm滤膜。”两种：1，一次性滤器；2，买滤膜自己装（需要消毒）蒸馏器与去离子纯水系统：专门的去离子水系统用三蒸水，通过去离子纯水系统，电阻需达到170万欧姆以上。倒置相差显微镜：需用相差镜头和滤光片，集光器的选择应与接物镜的放大倍数一致。纯水系统倒置相差显微镜1，物镜朝上2，工作距离大3，相差干涉5，培养器皿培养板与培养瓶5，恒温水浴箱，血清灭活，细胞解冻6，移液管7，低速离心机干粉培养基和液体培养基常用的培养基种类RPMI-1640（标准型）、DMEM-高糖（标准型）、DMEM-低糖（标准型）、McCoys5A、M199、F12等Gibco干粉培养液液体培养液1，培养在使用之前需要加入的成分：血清、H2CO3,丙酮酸钠、抗生素等Hyclone胎牛血清Gibco胎牛血清血清使用前要根据需要的量进行分装，避免反复冻融，血清保存要放置－20℃用多种培养液培养目的细胞，观察其生长状态，可以用生长曲线、集落形成率等指标判断，根据实验结果选择最佳培养基，这是最客观的方法，但比较繁琐。没有一定的标准，有几点建议可供参考其它实验室惯用的培养液不妨一试，许多培养液可以适合多种细胞。选择培养这种细胞首选的培养液。可以查阅参考文献，或在购买细胞株时咨询。总之，首选MEM做粘附细胞培养、RPMI-1640做悬浮细胞培养，各种目的无血清培养的首选是AIMV培养基（SFM）。培养液的选择血清必须贮存于–20～-70℃，若存放于4℃，请勿超过一个月。血清解冻步骤(逐步解冻法):-20℃或–70℃至4℃冰箱溶解一天，至室温下全溶后再分装。在溶解过程中须规则摇晃均匀(小心勿造成气泡)，使温度与成分均一，减少沉淀的发生。勿直接由–20℃直接至37℃解冻，因温度改变太大，容易造成蛋白质凝结而发生沉淀。热灭活（heat-inactivation）是指56℃,30分钟加热已完全解冻之血清。目的是使血清中之补体成份(complement)去活化。除非必须，一般不建议作此热处理，因为会造成沉淀物显著增多，且会影响血清之品质。勿将血清置于37℃太久，若在37℃放置太久，血清会变得混浊，同时血清中许多较不稳定之成份亦会因此受到破坏，而影响血清之品质血清使用注意事项游走细胞型：01.散在生长，不连成片，呈活跃游走或变形运动，方向不规则。02.此型细胞不稳定，有时难以和其他细胞相区别。多型细胞型：有一些细胞，如神经细胞难以确定其规律和稳定的形态，可统归于此类。（三）培养细胞的生长和增殖过程当细胞发生遗传改变，如获永生性或恶性转化时，细胞的生存期才可能发生改变。供体为成体或衰老个体，则生存时间较短；是指细胞在培养中持续增殖和生长的时间。肝细胞或肾细胞，生存时间更短，仅能传几代