《基因利器——分子克隆技术》课件.ppt

基因编辑利器——分子克隆技术;课程目标与学习要点;什么是分子克隆？;分子克隆技术的发展历史;DNA重组技术的里程碑事件;分子克隆的基本原理;分子克隆的关键要素;DNA载体系统概述;质粒载体的特点;常见质粒载体类型;病毒载体系统介绍;细菌人工染色体（BAC）;酵母人工染色体（YAC）;限制性内切酶的作用原理;常用限制性内切酶;粘性末端与平末端;DNA连接酶的作用机制;T4DNA连接酶特点;克隆实验室基本设备介绍;无菌操作技术要点;PCR扩增技术原理;PCR反应体系组成;引物设计策略;PCR优化方法;实时荧光定量PCR技术;琼脂糖凝胶电泳原理;电泳分析方法;DNA片段纯化技术;感受态细胞的制备;化学转化法;电转化法;蓝白斑筛选原理;抗生素筛选方法;菌落PCR验证;质粒提取方法;限制性酶切分析;DNA测序验证;表达载体的选择;启动子类型及特点;诱导表达系统;蛋白表达条件优化;重组蛋白纯化方法;实验室安全操作规程;生物安全防护措施;实验废弃物处理;troubleshooting指南;常见问题解决方案;实验失败原因分析;分子克隆实验设计;GibsonAssembly技术;GoldenGate克隆法;Gateway克隆系统;CRISPR基因编辑应用;基因敲除技术;基因敲入技术;同源重组技术;转基因生物构建;基因治疗应用前景;伦理问题讨论;案例分析：β地中海贫血基因治疗