分子克隆技术课件.ppt

分子克隆技术;分子克隆（molecularcloning）

又称为基因克隆、基因工程、DNA克隆、重组DNA技术;基本原理：

将编码某一多肽或蛋白质的基因（外源基因）组装到细菌质粒（质粒是细菌染色体外的双链环状DNA分子）中，再将重组质粒转入大肠杆菌，这样重组质粒就随大肠杆菌的增殖而复制，从而克隆基因或表达出外源基因编码的相应多肽或蛋白质。

;Asaresultofthiswork,PaulBergsharedthe1980NobelPrizeinChemistrywithWalterGilbertandFrederickSangerforfundamentalstudiesofthebiochemistryofnucleicacids,withparticularregardtorecombinant-DNA.;大肠杆菌转化体系的建立：感受态菌制备

经氯化钙处理的大肠杆菌能够摄取质粒DNA。;分子克隆中的关键技术：

DNA分子的分离和富集技术；DNA分子的切割与连接技术；

载体构建技术；大肠杆菌转化技术；

重组DNA分子的筛选和鉴定技术;载体特征：

1.能自主复制的复制子

2.可供筛选的遗传标记

3.适当大小的分子量

4.合适的限制性内切酶位点，方便外源基因的插入

5.在受体细胞中高效复制;TA克隆的idea最初来自1994年。几位学者发现TaqDNA聚合酶在PCR产物的3`末端加上一个脱氧腺苷（A），而且这种特性与模板无关。之后，invitrogen公司发明了TA克隆技术，并拥有全球TAcloning商标的专利权。线性化的T载体在3`末端拥有一个脱氧胸苷（T），与PCR产物的A尾巴互补。;分子克隆技术;分子克隆技术;工具酶;筛选标记

抗生素抗性筛选;蓝白筛选：

lacZ基因

β-半乳糖苷酶

α互补;谢谢聆听！