重组人早孕因子的表达与纯化.pdf

中国农学通报 2011,27(14):40-44 Chinese Agricultural Science Bulletin 重组人早孕因子的表达与纯化 1 1,2 2 2 1 1 2 1 杜晓明 ，张改平 ，王 丽 ，郭军庆 ，王林林 ，冯 华 ，权 凯 ，王爱萍 1 ( 郑州大学生物工程系，郑州450001 ； 2 河南省农业科学院，农业部动物免疫学重点开放实验室，河南省动物免疫学重点实验室，郑州450002) 摘 要：早孕因子（EPF ）是具有免疫抑制和生长调节活性的妊娠相关蛋白，为目前最早确认妊娠的生化 指标之一。为获得人早孕因子重组蛋白，通过PCR 技术扩增人早孕因子基因，克隆入原核表达载体 pGEX-6p- 1，与GST 基因相融合，构建重组表达质粒，转化大肠杆菌表达菌株BL21 ，经异丙基-β-D-硫代 半乳糖苷（IPTG ）诱导表达，以SDS和Western blot 分析重组蛋白的表达，通过GST 树脂纯化表达 蛋白。结果成功构建重组表达质粒pGEX6P-EPF ，在大肠杆菌中诱导表达了GST- EPF 融合蛋白，表达蛋 白分子量为37.3 kDa ，并能被抗GST 单克隆抗体特异识别，GST 亲和层析纯化，制备了EPF 重组蛋白。 关键词：早孕因子；原核表达；重组蛋白 中图分类号：R714.1 文献标志码：A 论文编号：2011-0138 ProkaryoticExpressionandPurificationofEarlyPregnancyFactorProtein 1 1,2 2 2 DuXiaoming,ZhangGaiping ,WangLi,GuoJunqing, WangLinlin,FengHua,QuanKai,WangAiping1 1 2 1 1 (Department of Bioengineering, Zhengzhou University,Zhengzhou450001； 2Key Laboratory of Animal Immunology of the Ministry of Agriculture, Henan Provincial Key Laboratory of Animal Immunology, Henan Academy of Agricultural Sciences,Zhengzhou450002) Abstract: Earlypregnancyfactor(EPF)isapregnancy-associatedproteinthathasimmune-suppressiveand growth-regulatoryactivities.Itisregardedasabiochemicalindexbywhichsuper-earlypregnancycanbe determined.TheobjectiveofthestudywastoexpresstherecombinantEPFproteininEscherichiacoli(E.coli). TheEPF geneamplifiedbyPCRwassub-clonedintoapGEX-6P-1vectorfusedwithGST genetoconstructa recombinantplasm