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慢病毒载体构建、病毒包装实验操作手册

一、简介

慢病毒(Lentivirus)载体是以人类免疫缺陷型病毒(HIV)为基发展起来的基因治

疗载体,它对分裂细胞和非分裂细胞均具有感染能力，并可以在体内较长期的表达且安全

性高。我们提供的慢病毒为复制缺陷型病毒，即病毒感染目的细胞后不会再感染其他细胞，

也不会利用宿主细胞产生新的病毒颗粒。慢病毒中的毒性基因已经被剔除并被外源性目的

基因所取代,属于假型病毒。但该病毒仍然具有可能的潜在的生物学危险，我们建议不要

使用编码已知或可能会致鹿的基因的假型病毒，除非已经完全公认某个基因肯定没有致癌

性，否则均不建议采用彳鲤病毒进行生物学实验。

复百澳公司所用的慢病毒载体是在Clonetech公司的慢病毒包装系统上改进而来。包

括载体质粒(PFV：PLVX)、辅助质粒psPAX2(pHelper1)和辅助质粒pMD2G(pHelper2)

三种质粒组成。载体质粒PFV载体中含有HIV的基本元件5LR和3LR以及其他辅

助元件。通常根据不同的实验目的针对载体质粒进行改造来进行启动子活性研究、基因表

达研究?口RNA干扰等研究。pHelper1载体中含有HIV病毒的gag基因，编码病毒主要的

结构蛋白；pol基因，编码病毒特异性的酶；rev基因，编码调节gag和pol基因表达的调

节因子。pHelper2载体中含有单纯疱疹病毒来源的VSV-G基因,提供病毒包装所需要的

包膜蛋白。

本手册为复百澳公司慢病毒载体的构建和病毒包装的通用操作流程，目的是为了方便大家

交流使用,部分细节内容未能做到一详述,敬请谅解.同时希望大家能够针

对手册中的错误和问题，提出宝贵的意见。

服务及实验流程

1.病毒包装服务流程图

客户提供公司服务

呼酒潘.德

2.病毒包装实验操作流程图

三质粒共转病毒上清液超速

293T细胞离心浓缩纯化

24H一次收毒换液慢病毒质检

48H二次收毒

三、实验材料

1.细胞株：293细胞，用于病毒包装。

2.大肠杆菌菌株：OP10,用于扩增慢病毒载体和辅助包装载体质粒。

3.病毒载体质粒：载体质粒、pHelper1质粒和pHelper2质粒

4.试剂：

试剂名称试剂来源-

胎牛血清胎牛血清Sh30084.03

DMEM（高糖）HycloneSh30022.01B

胰酶HycloneSH30042.01

Lipofectamine2000Invitrogen11668-500

NEB

限制性内切酶

NEBLife15224-041