汉恒生物技术文件-腺病毒载体操作手册1407-R3.pdf

腺病毒载体操作手册 腺病毒载体操作手册 一、实验流程 制备腺病毒穿梭质粒，分别高纯度无内毒素抽提腺病毒穿梭质 粒和骨架质粒，共转染293A细胞，转染后6h更换为完全培养基，培 养十几天，在中间四五天左右更换一次新鲜培养基，然后收集细胞和 1ml培液置于15ml离心管后，液氮/37度冻融三次（冻-融要彻底）， 2000rpm离心5分钟，取上清即为病毒液初代原液。连续三代反复扩 增收集病毒后，行病毒的大量扩增，然后通过CsCl密度梯度离心-透 析联用法纯化病毒。 二、实验材料 （一）腺病毒载体、包装细胞和菌株 该病毒包装系统为两质粒系统，组成为穿梭质粒（包括 pHBAd-CMV-IRES-GFP,pHBAd-CMV-IRES-RFP,pHBAd-U6-GFP, pHBAd-U6-RFP ）和骨架质粒pBHGlox （delta ）E1,3Cre 。其中穿 梭质粒pHBAd-CMV-IRES-GFP 和pHBAd-U6-GFP 能表达绿色荧光 1 公司地址：上海市徐汇区斜土路1175 号15 楼 E-mail:service@ Tel：021 实验室地址：上海市张江高科技园区蔡伦路720 弄张江药谷孵化器1 号楼314 腺病毒载体操作手册 蛋白（GFP ）。pHBAd-CMV-IRES-RFP 和 pHBAd-U6-RFP 能表达 红色荧光蛋白（RFP）。 1、载体信息 1) 腺病毒克隆载体图谱如下： SacII SacII XbaI(456) ( NotI ) XbaI(456) ITR p (NotI ) ITR U 6 ITR I