汉恒生物技术文件-腺病毒载体操作手册1407-R3.pdf
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腺病毒载体操作手册
腺病毒载体操作手册
一、实验流程
制备腺病毒穿梭质粒,分别高纯度无内毒素抽提腺病毒穿梭质
粒和骨架质粒,共转染293A细胞,转染后6h更换为完全培养基,培
养十几天,在中间四五天左右更换一次新鲜培养基,然后收集细胞和
1ml培液置于15ml离心管后,液氮/37度冻融三次(冻-融要彻底),
2000rpm离心5分钟,取上清即为病毒液初代原液。连续三代反复扩
增收集病毒后,行病毒的大量扩增,然后通过CsCl密度梯度离心-透
析联用法纯化病毒。
二、实验材料
(一)腺病毒载体、包装细胞和菌株
该病毒包装系统为两质粒系统,组成为穿梭质粒(包括
pHBAd-CMV-IRES-GFP,pHBAd-CMV-IRES-RFP,pHBAd-U6-GFP,
pHBAd-U6-RFP )和骨架质粒pBHGlox (delta )E1,3Cre 。其中穿
梭质粒pHBAd-CMV-IRES-GFP 和pHBAd-U6-GFP 能表达绿色荧光
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公司地址:上海市徐汇区斜土路1175 号15 楼 E-mail:service@
Tel:021
实验室地址:上海市张江高科技园区蔡伦路720 弄张江药谷孵化器1 号楼314
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蛋白(GFP )。pHBAd-CMV-IRES-RFP 和 pHBAd-U6-RFP 能表达
红色荧光蛋白(RFP)。
1、载体信息
1) 腺病毒克隆载体图谱如下:
SacII
SacII XbaI(456) ( NotI )
XbaI(456) ITR
p
(NotI ) ITR
U 6
ITR I
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