性病实验室操作手册.doc

第一章 淋病的实验 淋病(gonorrhea)是指由淋病奈瑟菌引起的泌尿生殖道的化脓性感染，如尿道炎、宫颈炎和直肠炎等。如不及时治疗，淋球菌可侵入泌尿生殖器的其他部位，引起附睾、前列腺、输卵管及盆腔等器官的炎症，甚至可经血液传播到全身其他部位，形成淋菌性关节炎、腱鞘炎、心内膜炎、脑膜炎等合并症。但另一方面，也有5%-20%的男性和60%的女性病人呈现无症状经过。淋球菌好侵犯人类泌尿生殖道的柱状上皮细胞，凭借特异的结构和粘膜表面与之相匹配的部位粘附。继而侵入细胞内增殖，使粘膜上皮破坏，形成炎症，出现一系列症状。 一、淋病诊断步骤 人类尿道上皮尤其是柱状上皮细胞对淋球菌相当敏感。在感染淋球菌后，经过一段时间的潜伏期(平均3天~5天)。由于细菌和毒素的作用，粘膜坏死、脱落、神经末梢暴露、炎症浸润、组织液渗出，病人会出现尿急、尿痛和尿道流脓等急性尿道炎症状。 淋球菌感染男性病人，常会出现尿痛和尿道流脓等临床症状。这时取尿道分泌物作涂片，经革兰染色后，如见到有符合淋球菌形态特征的革兰阴性细胞内双球菌，则初步诊断阳性，可对病人进行治疗；如涂片查菌阴性，应从尿道取标本进行淋球菌培养。淋球菌感染的女病人，常仅有脓性宫颈分泌物或无症状。对女病人不推荐用涂片法检查，而主张直接从宫颈取材进行培养。标本经培养后，菌落形态典型、氧化酶试验阳性，菌体为革兰阴性双球菌，则初步诊断为阳性培养物，如有某些性状不符合，则可进一步用糖发酵试验及直接免疫荧光法等作鉴定加以确诊。 二、标本的采集和运送 在取材作涂片时，应先用灭菌等渗盐水洗净尿道口，然后用手指由后向前挤出脓液，用棉拭或白金耳蘸取脓液后轻轻涂布于载玻片上。待自然干燥后作染色。如由男性病人前尿道取材作培养时，应用白金耳或藻酸钙拭子深入尿道2cm~4cm，取出的分泌物应略带粘膜。从女病人的宫颈取材时，应将棉拭插入宫颈口1.5cm，稍转动并停留10s~30s，让棉拭充分吸附分泌物。从肛门取材时，应将棉拭插入肛门2.5cm以上，从紧靠肛环边的隐窝中取材。检查淋菌性咽炎时从扁桃体或扁桃体窝或咽后壁取材。 淋球菌对外环境因素如干燥抵抗力很弱。因此，为了保证培养成功，应尽量缩短标本离体时间。在医院门诊部，从病人取材后，应立即接种到培养基上进行培养。如取材本处离实验室较远时，可将标本置于无营养性的Stuart或Amies运送培养基或选择性生长培养墓如Trmlsgrow中运送到实验室。标本在无营养运送培养中(在室温25℃条件下)，12h对分离率无影响，在24h内分离大于90%。如需时再应使用生长运送培养基，但即便如此，也不应超过2天。 淋病的涂片检查 【原理】 急性淋菌性尿道炎病人常有大量黄色脓性分泌物。在有些脓细胞内可有许多淋球菌。淋球菌革兰染色呈阴性反应，具有特殊的菌体形态。因此，取病人尿道分泌物制成涂片后做革兰染色，检查有无典型细胞内革兰阴性双球菌，可作初步诊断的依据。 【方法】 1．先用灭菌等渗盐水的拭子揩洗尿道口，然后用手指由后向前挤出脓液，蘸取脓液后轻轻涂布于载玻片上。待自然干燥后加热固定，染色，镜检。常用革兰染色，也可用美蓝染色。 2．涂片后，待自然干燥后火焰固定， 革兰氏染色：结晶紫染色1min。 碘媒染液染色1min。 乙醇丙酮脱色1min左右。 石炭酸复红复染1min。 晾干后油镜镜检。 【结果】 在急性病人的尿道脓性分泌物革兰染色涂片中，常可见到大量红色多形核白细胞。在有些细胞中吞噬有淋球菌。淋球菌为革兰阴性，呈卵圆形或圆形，常成对排列，接触面扁平或稍凹。菌体长约0.7μm，宽约0.5μm。但两菌大小可有差异。多数多形核细胞中并不含淋菌，但不少脓细胞中常含有一至数对，甚至20对30对淋球菌，淋球菌常存在于细胞浆内。 在病期较长的淋病病人的涂片中淋球菌比较少，有时呈单个、四联和八叠状，位于细胞外。对有些菌有时难以下结论，需进行培养和鉴定。 【注意事项】 1．涂片时不要用力涂擦，而应将棉拭在玻片上轻轻滚动，因急性病人诊断标准为见到“细胞内革兰阴性双球菌”。涂擦过劲，细胞破裂或变形，菌从细胞内逸出，会造成诊断上的混淆。 2．涂片厚薄要合适。涂片过厚，加之染色过程中脱色时间不足，革兰阴性菌也会呈现紫色。因此，脱色时间要视涂片厚薄而定。在大量染片时，最好用一已知的革兰阳性菌(如葡萄球菌)和阴性菌(如大肠杆菌)作对照。 3．固定涂片，只要将涂片迅速通过火焰2~3次，避免加热过度使细胞变形扭曲。当把加热的涂片放到手背上时应不感到太烫。 4．不推荐用涂片检查来诊断淋菌性直肠和咽部的感染，也不推荐用作判愈。 【临床意义】 涂片检查方法简便、有效、价格低廉且有一定的敏感性和特异性。但其特异性随着取材部位的不同而有所不同。例如，