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【科研明星细胞】HEK293细胞系培养攻略

HEK293细胞系家族历史概览

1973年，科学家从一个父母谱系不祥的人类流产胚胎的肾脏中分离出最原始的人胚肾细胞，即293细胞（human

embryonickidney(HEK)293cellline），该细胞被转入修改后的5型腺病毒DNA片段，一开始转化非常困难，一直

到几个月后，科学家得到一个稳定的可以快速生长的293单克隆细胞株，自此HEK293诞生。HEK293细胞在细胞生

物学和生物技术中的应用频率仅次于第一个人类细胞系HeLa，并衍生出数百种克隆细胞系。SV40largeT抗原稳转入

HEK293细胞而得到HEK293T；将HEK293驯化成能够悬浮培养并且能够耐受低钙离子培养条件而获得293S；而293F

细胞是一类能够在无血清中高表达蛋白的野生型293细胞系。HEK293家族如此庞大，成员的特点和应用也大不相同：

293T细胞-瞬时转染，蛋白表达；293H/A细胞-噬菌斑或空斑实验；293E细胞-重组蛋白的生产；293F细胞-慢病毒的

生产和293S细胞-糖基化蛋白的表达。小优今天主要给大家介绍的是HEK293和HEK293T的细胞特性以及如何培养。

细胞培养的基本操作，大家可以参考《从零开始-细胞培养入门指南》。

图1HEK293细胞系家族历史概览

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HEK293细胞培养攻略

细胞特点

HEK293细胞既可以贴壁培养也可以悬浮培养，细胞在贴壁生长时可能呈扁平状，悬浮生长时则呈圆形。但多数情况下，

这类细胞采用贴壁的方式进行单层培养。HEK293细胞适应酸性环境，pH值在6.9～7.1时可顺利贴壁生长。HEK293

细胞的另一生长特性是贴壁所需时间长且贴壁不牢。其在无Ca2+或含Ca2+培养基中可同样生长，也可生长在血清浓

度降低的培养基中，另外，HEK293细胞培养基通常为高葡萄糖细胞培养基。HEK293细胞可用于慢病毒包装生产及滴

度测定，细胞转染，蛋白表达验证等试验。

培养条件（来自ATCC和中国科学院细胞库/干细胞库）

温度：37℃

CO2：5%

完全培养基配方：EaglesMinimumEssentialMedium（EMEM）+10%胎牛血清（ATCC）；

或DMEM培养基+10%胎牛血清（中国科学院细胞库/干细胞库）

细胞形态：上皮样，贴壁生长

传代比例：细胞融合率达到80-90%即可传代，16-110。购买后的初次传代建议12。

换液频率：2-3天

传代周期：每周

冻存液配方：细胞完全培养液+含5%/8%DMSO（v/v）或商品化冻存液

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图2：贴壁生长的HEK293低密度和高密度时的细胞照片（来自ATCC）

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DMEM高糖培养基（含L-谷氨酰胺，不含丙酮酸钠，含HEPES）