利用显微镜直接计数微生物细胞.pdf

食品微生物

基本技能

利用显微镜直接计数酵母菌细胞

一、任务准备

器材与试剂

酵母菌菌液、光学显微镜、血球计数板、盖玻片、吸水纸、擦镜纸

、酒精灯、无菌滴管、接种环、95%酒精等。

知其然，知其所以然

《朱子语类》卷九亦有言：

“大抵观书，先须熟读，

思使其言皆若出于吾之口。

政继以精思，使其意皆若出

园

地于吾之心。然后可以有得

尔。”强调了学习同时思

考的重要性。

二、知识储备

血球计数板是一块特制的载玻片，其

中间较宽的平台被横槽隔成两半，每

一边的平台上各刻有一个方格网，每

个方格网共分为九个大方格。在划有

25大格×16小格

格子的区域中，有分别用双线和单线

分隔而成的方格。

其中有以双线为界划成的方格25（或16）格，以双线为界

的格子称为中方格，其内有以单线为界的16（或25）小格

16大格×25小格

。

二、知识储备

用于细胞计数区域的400个小格

排成一正方形的大方格（即计数

室），此大方格（计数室）的总

2

面积为1mm。

计数前，先取盖玻片盖于计数方格上，盖玻片的下面与刻有

方格的血球计数板平面之间留有0.1mm高度的空隙。含有细胞

3

的供测样品液被加注在此空隙中。计数室的总体积为0.1mm。

二、知识储备

计数后，获得400个小格中的细胞总数，再乘

4

以10和稀释倍数，即换算成每毫升（mL）所

含细胞数。

计算公式：

菌液样本的含菌数（个/mL）=每个小格平均

菌数×400×10000×稀释倍数

三、任务实施

1.检查血球计数板

取血球计数板一块，先用显微镜检查计数板的计数室，看

其是否沾有杂质或干涸着的菌体，若有污物则通过擦洗、

冲洗，使其清洁。

镜检清洗后的计数板，直至计数室无污物时方可使用。

三、任务实施

2.稀释样品

将酵母菌液振荡混匀，然后作一定倍数的稀释，稀释度选

择以小方格中的分布的菌体清晰可数为宜。

一般以每小格内含4~5个菌体的稀释度为宜。

三、任务实施

3.加样

取出一块洁净盖玻片盖在计数板中央。用

无菌滴管取一滴酵母菌稀释悬液注入盖玻

片边缘，让菌液自行渗入，若菌液太多可

用吸水纸吸去，静置5~10min。

三、任务实施

4.镜检

待细胞不动后进行镜检计数。

先用低倍镜找到计数室方格后，再用高倍镜计数。

三、任务实施

一般取五个中格进行计数，取格方法：

○计数板斜角线相连的五个中格

○4个角上的4个中格和正中央1个中格

计数原则：

○计上不计下

○计左不计右

每个样品重复3次

三、任务实施

5.计算

取以上计数的平均值，按公式计

算每毫升（mL）菌液中含菌量。

菌体细