蜡样芽孢杆菌磷脂酶D的分离纯化及表征.docx
蜡样芽孢杆菌磷脂酶D的分离纯化及表征
目录
蜡样芽孢杆菌磷脂酶D的分离纯化及表征（1）．．．．．．．．．．．．．．．．．．．3
一、内容概览．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．3
（一）磷脂酶D的概述及其在工业上的应用前景．．．．．．．．．．．．．．．．．．3
（二）蜡样芽孢杆菌磷脂酶D研究的必要性．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．4
（三）研究的预期目标及价值．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．5
二、蜡样芽孢杆菌磷脂酶D的分离与纯化技术．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．7
（一）蜡样芽孢杆菌的培养与提取．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．7
（二）磷脂酶D的初步分离与纯化方法选择．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．8
（三）磷脂酶D的精细纯化技术流程．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．9
（四）纯度检测与鉴定方法．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．10
三、磷脂酶D的生物化学性质研究．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．11
（一）酶的基本理化性质分析．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．12
（二）酶的活性测定及影响因素探讨．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．13
（三）酶的动力学研究．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．14
四、蜡样芽孢杆菌磷脂酶D的结构表征与功能分析．．．．．．．．．．．．．．．15
（一）酶的结构表征技术与方法选择．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．16
（二）酶的空间结构解析与功能域分析．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．18
（三）酶的活性中心研究及作用机制探讨．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．20
五、蜡样芽孢杆菌磷脂酶D的应用性能研究及评价．．．．．．．．．．．．．．．21
（一）酶在食品工业中的应用性能研究．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．22
（二）酶在医药工业中的应用性能研究．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．23
（三）酶在其他领域的应用性能评价及展望．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．24
六、实验设计与操作过程注意事项．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．26
（一）实验设计原则与步骤规划．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．27
（二）实验操作过程中的安全防护措施及建议．．．．．．．．．．．．．．．．．．28
七、实验结果分析与讨论．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．31
蜡样芽孢杆菌磷脂酶D的分离纯化及表征（2）．．．．．．．．．．．．．．．．．．31
一、内容概述．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．32
1.1研究背景与意义．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．32
1.2研究目的与内容．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．33
二、材料与方法．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．34
2.1实验材料．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．35
2.2实验仪器与设备．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．36
2.3实验试剂与培养基．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．37
2.4实验方法．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．37
三、蜡样芽孢杆菌磷脂酶D的初步分离．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．39
3.1细菌培养与筛选．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．40
3.2菌株鉴定．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．40
3.3磷脂酶D的初步纯化．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．41
四、蜡样芽孢杆菌磷脂酶D的分离纯化．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．42
4.1离子交换色谱纯化．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．43
4.2金属亲和色谱纯化．．．．．．．