长期耐力运动对大鼠肝细胞自由基代谢、线粒体膜电位及细胞凋亡的影响.pdf

·486· 长期耐力运动对大鼠肝细胞自由基代谢、线粒体 膜电位及细胞凋亡的影响 程丽彩1’2何玉秀1 1河北师范大学体育学院(石家庄050016)2郑州大学体育学院(郑州450044) 摘要 目的：探讨长期游泳耐力训练大鼠肝细胞凋亡的变化与机制，为进一步研究运动引发的细胞凋亡理 论和体育实践指导提供实验依据。方法：采用SD雄性大鼠28只，适应性喂养1周后，随机分为8周对照组、8 周运动组、12周对照组和12周运动组。运动组大鼠于每日上午8～9时进行无负重游泳运动，每周5次。运动 鼠肝细胞自由基代谢、线粒体膜电位和细胞凋亡变化。结果：与8周对照组相比，8周运动组肝细胞凋亡率显著 降(尸O．05)。结论：长期耐力运动可引起大鼠肝细胞凋亡，随着运动时间的延长，机体出现适应。 关键词 耐力运动；肝细胞凋亡；自由基；线粒体膜电位 肝细胞凋亡对于多细胞生物个体的正常发育、自稳态 分别于第8周和第12周运动结束后取材。取材前大 平衡的保持以及抵御外界各种因素的干扰方面都起着非 常关键的作用。这种动态平衡一旦被打破，便会启动或介 导机体损伤、衰老或其他疾病，因此肝细胞凋亡已成为生 血清，一20。C保存备用。取肝脏称重，切取肝脏右叶分成 命科学、医学病理学、药理学等学科的热点研究领域口]。 两份，一份(约39)用70％乙醇固定，4C保存备用，一份 大量研究证明，在大强度、长时间或者力竭运动状态 (约39)放入细胞培养液中，4U保存待测。对照组同期取 下，机体组织细胞会产生不同程度的细胞凋亡增多现象， 材。 甚至引发机体运动性疲劳和损伤心’3]。但是，对于长期、系 1．4指标测定 统的有氧耐力运动条件下的细胞凋亡研究则较少。本实 1．4．1生化指标检测 验通过观察耐力运动大鼠肝细胞凋亡及相关指标的变化， 肝细胞SOD测定采用均相竞争抑制原理放免法，肝 分析长期有氧耐力运动对机体抗氧化系统和肝细胞凋亡 细胞MDA测定采用硫代巴比妥酸比色法，检测试剂盒均 的影响机制，为科学训练的理论研究和防治长期运动导致 由南京建成生物工程研究所提供。 的急慢性肝病提供新的实验依据。 1．4．2肝细胞悬液制备 l材料与方法 取新鲜小鼠肝组织3克，用眼科剪刀将组织剪碎，边 1．1实验对象与分组 剪边用PBS液冲洗。过滤2次，收集细胞悬液，离心清洗2 、雄性Sprague—Dawley纯种大鼠28只，1月龄，体重次。显微镜下调整细胞浓度为1×106个／ml，制成标准的 140～1509，由河北医科大学实验动物中心提供。将大鼠单细胞悬液¨]。 1．4．3肝细胞凋亡率测定 适应性喂养1周后，随机分为8周对照组(C1，6只)、8周 运动组(E1，8只)、12周对照组(C2，6只)和12周运动组取肝脏单细胞悬液，细胞数控制在1×106个，离心弃 (E2，8只)。分笼饲养，自由饮水摄食，国家标准啮齿类动 物饲料。室温20C～26℃，每日自然光照12小时。 Coulter公司生产的 l。2运动训练方案 洗2次，洗去染液，采用美国Beckman 运动组适应性喂养3天后，适应性运动训练3天 (30min／d)。正式实验于每日上午8～9时进行无负重游 泳运动。每周5次，水温30℃士2C。第1周每次游泳免疫荧光数据分析，用MuticycleAV分析软件对DNA细 30min，第2周60min，第3周90min，保持此运动量一直到胞周期进行分析。 第8或12周H]。对照组浸水后捞出。 采用流式细胞术(Flow 1．3取材 体细胞DNA倍体与细胞周期时，将