研究重组人白细胞介素.ppt

重组人白细胞介素-2

RecombinantHumanInterleukin-2赵丽娜李文生20094710140生物技术1班白细胞介素定义由白细胞分泌的一类调节细胞生长、分化和免疫活性的细胞因子。（狭义）一组由多种类型细胞所分泌的、结构和功能各异的可溶性蛋白，参与细胞间信息交换，目前已发现IL-1~IL-33。（广义）一般具有多来源、多功能和多作用途径的特点。其立体结构有β三叶草型、4-螺旋束型和β三明治型等。信号转导方式有胞外因子-受体复合体相互作用和胞内信号传递途径等。主要内容注意事项发展前景作用用途生产制备药物信息一、作用用途刺激B细胞增殖分化和分泌抗体，也用于先天或后天免疫缺陷症的治疗。诱导干扰素和多种细胞因子的分泌为多肽类免疫增强剂，是一种淋巴因子。用于肿瘤辅助治疗和癌性胸、腹水的治疗。也可各种自身免疫病的治疗，如类风湿性关节炎等。对乙型肝炎、麻风病、肺结核、白色念珠菌感染等具有一定的治疗作用。添加标题添加标题添加标题添加标题添加标题添加标题二、生产制备生产制备的方式主要有两种：传统工艺制备基因工程制备其中以第二种方法为主传统工艺流程鸡瘟病毒，PHA,培养液[启动诱生]37℃人白细胞粉诱生白细胞培养液[灭活病毒，分离],HCl,NaOHpH=2~2.5,pH=7.2~7.4,离心上清液35%硫酸铵4℃，24h，离心上清液85%硫酸铵4℃，24h，离心沉淀10mmol/LPBS透析pH=6.5，24h透析内液[亲和层析]上Sepharose柱pH=6.5亲和载体I[洗涤]0.4mol/LNaCl，PBSpH=6.5亲和载体Ⅱ[吸收]1.0mol/LNaCl,PBS透析pH=6.5IL-2组分[凝胶层析]上Utrogel柱pH=6.5凝胶载体0.2mol/Ltris-HCl含0.1%PEG2%正丁醇，0.2mol/L甘氨酸pH=7.6IL-2基因工程制备流程IL-2cDNA文库的构建01添加标题IL-2表达02添加标题利用mRNA杂交筛选03添加标题IL-2cDNA克隆04添加标题与质粒载体pLY-4连接，并转入大肠杆菌05添加标题纯化的IL-206添加标题制备包涵体，并用凝胶过滤层析纯化07添加标题cDNA文库的构建IL-2mRNA逆转录酶逆转录成单链cDNA末端脱氧核苷酸转移酶cDNA末端连接dCMP残基，寡聚（dG）12~18为引物DNA聚合酶I双链cDNA蔗糖密度梯度离心cDNA片段G-C加尾法插入到pBR322质粒的PstI位点重组质粒转化大肠杆菌得到IL-2cDNA文库三、药物信息药典中有以下三种药物含有重组人白细胞素介素-2：注射用重组人白细胞介素-2重组人白细胞介素-2注射液注射用重组人白细胞介素-2（Ⅰ）注射用重组人白细胞介素-21.性状及功效高效表达人白细胞介素-2的大肠杆菌，经过发酵、分离和高度纯化后获得的重组人白细胞介素-2冻干制成，含有适宜稳定剂，不含添加剂和抗生素。外观为白色或者微黄色疏松体，加灭菌注射水后迅速溶解为澄明液体。用于治疗成人转移性肾细胞癌（RCC）及黑色素瘤等恶性肿瘤，也适用于癌性胸腹水的控制2.用法用量（1）.全身用药静脉滴注：10万一80万国际单位；皮下注射：50万—100万国际单位；介入动脉灌注：40万—l00万国际单位2.用法用量（2）.区域与局部给药胸腹腔注射：30万—l00万国际单位；肿瘤灶局部给药：根据瘤体大小决定用药剂量。一般剂量为一次20万国际单位(IU)。注：药物采用氯化钠溶解。重组人白细胞介素-2注射液性状及功效性状高效表达人白细胞介素-2的大肠杆菌，经过发酵、分离和高度纯化后获得的重组人白细胞介素-2制成，含有适宜稳定剂，不含添加剂和抗生素。外观为无色或者微黄色澄明液体。功效#20222.用法用量（1）.全身用药：皮下注射：重组人白介素-2（125Ala）60－100万IU/m2，皮下注射3次/周，6周为一疗程。静脉注射：40～80万U/m2加生理盐水500ml，滴注时间不少于4小时。介入动脉灌注50～100万IU/次，2～4周一次，2～4次为一疗程。2.用法用量胸腔注入：用于癌性胸腔积液，重组人白介素－2（125Ala）100～200万IU/m2次，尽量抽去腔内积液后注入。1肿瘤病灶局部给药：根据瘤体大小决定