DN37-海洋动物组织基因组DNA快速提取试剂盒.doc

◆ TRIpure Reagent 抽提指南 ◆ ◆ 使用手册 ◆ 实验室使用，仅用于体外 ◆ TRIpure Reagent 抽提指南 ◆ ◆ 使用手册 ◆ 实验室使用，仅用于体外 ◆ TRIpure Reagent 抽提指南 ◆ ◆ 使用手册 ◆ 实验室使用，仅用于体外 ◆ 海洋动物组织基因组DNA提取试剂盒 ◆ 目录号 DN37 ◆ 使用手册 ◆ 实验室使用，仅用于体外 海洋动物组织基因组DNA快速提取试剂盒目录号：适用于快速提取各种基因组DN试剂盒组成、储存、稳定性： 试剂盒组成 保存 50次0次0次 裂解液L 室温 11 ml 2 ml 40 ml 结合液CB 室温 11 ml 2 ml 40 ml 抑制物去除液IR 室温 2 ml 50 ml 100 ml 漂洗液WB 室温 15 ml ml 50 ml第一次使用前按说明加指定量乙醇 洗脱缓冲液EB 室温 15 ml ml 15ml×2 蛋白酶K粉 （可选）20mg/ml -20 20mg 2×20mg 4×20mg 吸附柱AC 室温 50个 100个 200个 收集管（2ml） 室温 50个 100个 200个 本试剂盒在室温储存12个月不影响使用效果储存事项: 结合液CB或者抑制物去除液IR低温时可能出现析出和沉淀，可以在37℃水浴几分钟帮助重新溶解，恢复澄清透明后冷却到室温即可使用。 为避免降低活性、方便运输，提供蛋白酶K为冻干粉状，收到后，可短暂离心后，加入1ml灭菌水溶解，因为反复冻融可能会降低酶活性，因此溶解后立即按照每次使用量 20微升 分装冻存，－20℃保存。 避免试剂长时间暴露于空气中产生挥发、氧化、pH值变化，各溶液使用后应及时盖紧盖子。产品介绍： 独特的结合液/蛋白酶K迅速裂解细胞和灭活细胞内核酸酶，然后基因组DNA在高离序盐状态下选择性吸附于离心柱内硅基质膜， 再通过一系列快速的漂洗－离心的步骤， 抑制物去除液和漂洗液将细胞代谢物、蛋白等杂质去除， 最后低盐的洗脱缓冲液将纯净基因组DNA从硅基质膜上洗脱。 注意事项 洗脱液EB不含有螯合剂EDTA，不影响下游酶切、连接等反应。也可以使用水洗脱，但应该确保批pH大于7.5， pH过低影响洗脱效率。用水洗脱应该保存在－20。DNA如果需要长期保存，可以用TE缓冲液洗脱（10mM Tris-HCl， 1mM EDTA，pH 8.0），但是EDTA可能影响下游酶切反应，使用时可以适当稀释。 操作步骤：（实验前请先阅读注意事项） 提示：第一次使用前请先在漂洗液WB中加入无水乙醇，充分混匀，加入后请及时在方框打钩标记已加入乙醇，以免多次加入! 0μl组织裂解液L的1.5ml离心 根据提取的组织不同，起始量也稍有不同，腮的细胞量较大，一般建议提取量不超过20mg。如果裂解困难，可先用液氮研磨。 加入20μl的蛋白酶K溶液 20mg/ml ，。将裂解物放置在55℃水浴1小时或者直到组织消化完全。可选做步骤: 如果RNA残留较多，需要去除RNA，可20μl RNase A 25mg/ml 溶液，振荡混匀，室温放置5-10分钟。加入200μl 结合液CB，，70℃放置10分钟。 冷却后加100μl 异丙醇，，。 混合物加入一个吸附柱AC中，（吸附柱放入收集管中）1,000rpm离心秒，倒掉收集管中的废液。不溶组织物可能堵住枪头，可将枪头在吸水纸上轻蹭去除不溶物；如果吸上来的混合物少则可以将枪头和不溶物一起弃去，该是为了去除不溶物，以免堵塞离心柱。上述步骤中充分混匀非常重要，混匀不充分严重降低产量，必要时如样品粘稠不易混匀时可以涡旋振荡15秒混匀。 加入500μl抑制物去除液IR，12,000rpm 离心30秒，弃废液。 加入00μl漂洗液WB（请先检查是否已加入无水乙醇!），12,000rpm 离心30秒，弃掉废液。 加入00μl漂洗液WB，12,000rpm 离心30秒，弃掉废液。 将吸附柱AC放回空收集管中，13,000rpm离心2分钟，尽量除去漂洗液， 以免漂洗液中残留乙醇抑制下游反应。 取出吸附柱AC，放入一个干净的离心管中，在吸附膜的中间部位加100μl洗脱缓冲液EB （洗脱缓冲液事先在65-70℃水浴中预热）， 室温放置3-5分钟，12,000rpm 离心1分钟。将得到的溶液重新加入离心吸附柱中，室温放置2分钟，12,000rpm离心1分钟。 洗脱体积越大，洗脱效率越高，如果需要DNA浓度较高，可以适当减少洗脱体积， 但是最小体积不应少于50μl，体积过小降低DNA洗脱效率，减少DNA产量。 DNA可以存放在2-8℃，如果要长时间存放，可以放置在－20℃。 - 1 - - 3 - - 1 -