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PCR技术PCR技术的应用

一滴残留在裙子上的精液使得美国总统BillC1inton不得不坦承他与白宫实

习生有不法的关系。由于他知道现在的生物科技就连一个精子也能被用来做

为证据。这种将极微量的生物标本化为可供鉴定的现代技术正是PCR(Polymer

asechainreaction)--聚酶链式反映具有的特色之一。这也是分子生

物医学令人震撼的一例。

何谓PCR

简朴的说，PCR就是运用DNA聚酶对特定基因做体外或试管内(InV

itro)的大量成。基本上它是运用DNA聚酶进行专一性的连锁复制.目前常

用的技术，可以将一段基因复制为本来的一百亿至一千亿倍。

APCR的要素

基本的PCR须具有1.要被复制的DNA模板(Template)2.界定复制范

围两端的引物(Primers).3.DNA聚酶(Ta.Polymearse)4.成的原料

及水。PCR的反映涉及三个重要环节，分别是1).Denaturation2).A

nnea1ingofprimers,and3).Extensionofprimerso所谓

Denaturing乃是将DNA加热变性，将双股的DNA加热后转为单股DNA以

做为复制的模板.而Annealing则是令Primers于一定的温度下附着于模板

DNA两端。最后在DNA聚酶(e.g.Ta-poIymerase)的作用下进行

引物的延长(Extensionofprimers)及另一股的成。

PCR的问题，无疑是绝大多数学生物的人都关心的问题。今天我们把相关内容

整理出来，与大家共同讨论，希望对大家能有所帮助C

④一、引物设计A所谓工“欲善其事泌先利其器”，这年头手工设计引物的人似乎不

多，还是用软件方便些，防止你一不小心看走眼，丢一个碱基，同时计算起来

也方便。设计软件有很多，既可以在线设计(如Primer3http://frodo.wi.mi

t.edu/cgi-bin/primer3/primer3www.cgi),也可以用Primer5、0

Iigo6.65等等。

1.引物设计的原则

细心地进行引物设计是PCR中最重要的一步。抱负的引物对只同目的序列两

侧的单一序列而非其他序列退火。设计糟糕的引物也许会同时扩增其他的非目

的序列。下面的指导描述了一个可以增特异性的引物所具有的令人满意的特

点:S)典型的引物18到24个核昔。引物需要足够，保证序列独特性，并

减少序列存在于非目的序列位点的也许性。但是度大于24核昔的引物并不

意味着更高的特异性。较的序列也许会与错误配对序列杂交，减少了特异性,

并且比短序列杂交慢，从而减少了产量。42)选择GC含量为40%到60%或G

C含量与模板GC含量接近的引物。分)设计5端和中间区为G或C的

引物。这会增引物的稳定性和引物同目的序列杂交的稳定性。

4)避免引物对3末端存在互补序列,这会形成引物二聚体，克制扩增。在用软件

设计时大家经常会疑惑,究竟？G不能低于多少?这里有个数据：？G为

0~-2时,PCR产率可达100%,?G=-6时，