动物胃肠道微生物源纤维素酶基因挖掘及其功能研究.docx

动物胃肠道微生物源纤维素酶基因挖掘及其功能研究

目录

内容描述．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．4

1.1研究背景与意义．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．4

1.1.1纤维素酶在动物消化系统中的作用．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．5

1.1.2微生物源纤维素酶的研究现状．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．6

1.1.3本研究的目的与意义．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．8

1.2研究内容与方法．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．9

1.2.1实验材料与设备．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．10

1.2.2实验方法．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．12

1.2.3数据收集与分析方法．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．12

文献综述．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．14

2.1纤维素酶的分类与功能．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．16

2.1.1纤维素酶的分类．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．16

2.1.2纤维素酶的功能．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．17

2.1.3纤维素酶在动物消化中的作用机制．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．18

2.2动物胃肠道微生物群落结构．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．19

2.2.1肠道微生物群落的组成．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．20

2.2.2肠道微生物群落的动态变化．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．23

2.2.3肠道微生物群落对宿主健康的影响．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．25

2.3纤维素酶基因的发现与应用．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．26

2.3.1纤维素酶基因的发现历程．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．26

2.3.2纤维素酶基因的应用现状．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．28

2.3.3纤维素酶基因研究的发展趋势．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．29

动物胃肠道微生物源纤维素酶基因挖掘．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．31

3.1目标基因的筛选与鉴定．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．32

3.1.1筛选标准与方法．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．33

3.1.2初步筛选结果．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．34

3.1.3目标基因的进一步鉴定．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．35

3.2目标基因的克隆与表达．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．36

3.2.1目标基因的克隆策略．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．41

3.2.2目标基因的表达载体构建．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．42

3.2.3重组质粒的转化与表达．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．43

3.3目标基因的功能验证．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．45

3.3.1基因敲除与过表达实验设计．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．45

3.3.2基因敲除与过表达效果评估．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．47

3.3.3功能验证结果分析．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．49

纤维素酶基因的功能研究．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．50

4.1纤维素酶基因在动物体内的表达调控．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．51

4.1.1表达模式分析．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．53

4.1.2表达调控机制探讨．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．