DB13T 2598-2017 花生品种真实性与纯度鉴定 SSR法.docx

ICS67.060

B22

DB13

河北省地方标准

DB13/T2598—2017

花生品种真实性与纯度鉴定SSR法

2017-12-22实施2017-11-22发布

2017-12-22实施

河北省质量技术监督局发布

I

DB13/T2598—2017

前言

本标准按照GB/T1.1-2009给出的规则起草。

本标准由河北农业大学提出。

本标准起草单位：河北农业大学。

本标准主要起草人：杨鑫雷、刘立峰、崔顺立、郭丽果、陈焕英、穆国俊、李洪珍。

DB13/T2598—2017

花生品种真实性与纯度鉴定SSR法

1范围

本标准规定了利用SSR标记对花生品种真实性与纯度进行鉴定的术语和定义、原理、试剂材料、操作程序、数据分析和判定规则。

本标准适用于利用SSR法对花生品种真实性与纯度鉴定的试验过程。

2规范性引用文件

下列文件对于本文件的应用是必不可少的。凡是注日期的引用文件，仅注日期的版本适用于本文件。凡是不注日期的引用文件，其最新版本(包括所有的修改单)适用于本文件。

GB/T3543.2-1995农作物种子检验规程扦样

GB/T3543.4-1995农作物种子检验规程发芽试验

GB/T6682-2008分析实验室用水规格和试验方法

3术语和定义

下列术语和定义适用于本文件。

3.1

品种真实性(VarietalGenuineness)

供检品种与文件记录(如标签等)是否相符。

3.2

品种纯度(VarietalPurity)

品种在特征特性方面典型一致的程度，用供检样品中本品种的种子数占样品种子总数的百分率表示。

3.3

简单重复序列SSR(SimpleSequenceRepeat)

基因组中以几个核苷酸(一般为2个~6个)为重复单元的长达几十至几百个核苷酸的串联重复序列，又称微卫星标记。

注：由于基本单元重复次数的不同，形成了SSR长度的多态性。

3.4

聚合酶链式反应PCR(PolymeraseChainReaction)

一种用于在体外扩增DNA序列的技术程序。

注：模板DNA经高温变性为单链，在DNA聚合酶和适宜温度下，两条引物分别与DNA模板两条链上的一段互补序列发生退火，并在DNA聚合酶的催化下以四种dNTP(deoxy-ribonucleosidetriphosphate,脱氧核苷三磷酸)为底物，使退火引物延伸从而合成DNA。如此变性退火和合成DNA反复循环，使位于两段已知序列之间的DNA片段呈几何倍数扩增。

工

2

DB13/T2598—2017

3.5

引物Primer

结合在模板DNA上的互补短链，提供3′-OH末端作为DNA合成的起点，延伸合成模板DNA的互补链。

3.6

核心引物CorePrimer

SSR标记分析优先选用多态性高、稳定性好，识别能力强的一套引物的引物。

3.7

标准样品StandardSample

代表已知品种特征特性的育种家种子作为标准样品。

4原理

花生基因组中存在着大量简单重复序列(SSR),由于SSR单元在不同基因型间重复次数不同，因此同一位点的SSR在不同品种间往往具有丰富的长度多态性。利用PCR技术扩增每个位点的简单重复序列，通过电泳分析其长度多态性，达到区别不同花生品种的目的。

5试剂或材料

警示：丙烯酰胺、甲叉双丙烯酰胺具神经毒性，配制时应注意防护。

除非另有说明，使用分析纯试剂和重蒸馏水应符合GB/T6682规定的一级水。

5.1三羟甲基氨基甲烷(Tris):分子式为C?H?NO?,CAS77-86-1。

5.2氯化锂(LiCl):CAS7447-41-8。

5.3乙二胺四乙酸二钠盐(EDTA·Na?):分子式为C??H??N?O?Na?·2H?O,CAS60-00-4。

5.4十二烷基硫酸钠(SDS):分子式为C??H??NaO?S,CAS151-21-3。

5.5聚乙烯吡咯烷酮(PVP):分子式为(C?H?NO)41,CAS9003-39-8。

5.6β-巯基乙醇：分子式为C?H?OS,CAS60-24-2。

5.7酸酚(acidphenolpH4.3)。

5.8异戊醇：分子式为C?H??0,CAS123-51-3。

5.9Tr