大鼠骨髓间充质干细胞的分离培养与鉴定技术研究.docx
大鼠骨髓间充质干细胞的分离培养与鉴定技术研究
目录
大鼠骨髓间充质干细胞的分离培养与鉴定技术研究（1）．．．．．．．．．．4
一、内容概览．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．4
（一）研究背景．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．5
（二）研究意义．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．5
二、材料与方法．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．6
（一）实验动物．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．11
（二）主要试剂与仪器．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．12
（三）实验步骤．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．13
（四）实验分组与处理．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．14
（五）细胞分离与培养条件．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．15
（六）细胞传代与扩增．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．16
三、大鼠骨髓间充质干细胞的分离．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．17
（一）骨髓细胞的采集与处理．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．18
（二）细胞悬液的制备．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．19
（三）Ficoll分离法．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．20
（四）密度梯度离心法．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．22
四、大鼠骨髓间充质干细胞的分离培养．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．25
（一）培养基的选择与配制．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．25
（二）细胞接种与初始培养．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．26
（三）细胞贴壁与生长特性．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．27
（四）细胞克隆形成能力．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．28
五、大鼠骨髓间充质干细胞的鉴定．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．30
（一）形态学鉴定．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．30
（二）细胞表面标志物检测．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．32
（三）细胞增殖能力检测．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．33
（四）细胞多向分化潜能．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．34
六、结果与分析．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．35
（一）细胞分离效果评价．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．36
（二）细胞培养特性观察．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．40
（三）细胞鉴定结果．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．41
（四）细胞生物学特性分析．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．42
七、讨论．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．42
（一）分离方法的优势与局限性．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．43
（二）培养条件对细胞生长特性的影响．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．46
（三）鉴定方法的可靠性与适用性．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．47
八、结论与展望．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．48
（一）研究主要发现．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．49
（二）研究的创新点．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．50
（三）未来研究方向与展望．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．52
大鼠骨髓间充质干细胞的分离培